黄曲霉毒素B1(AFB1)主要是由黄曲霉、寄生曲霉和特曲霉产生的,是真菌的次级代谢物,是天然食物中最为多见的一种真菌毒素,主要污染花生、玉米、稻谷、小麦、花生油等粮油食品。黄曲霉毒素B1是已知的化学物质中致癌性最强的一种,对人和动物具有极强的毒性和致癌性,其毒性作用主要是对肝脏的损害。因此,国家质检总局规定黄曲霉毒素B1是大部分食品的必检项目之一。
食品中黄曲霉毒素B1的检测方法主要有酶联免疫吸附法(ELISA)、高效液相色谱法(HPLC)、薄层色谱法(TLC)等,其检测原理以及仪器配置如下:
一、酶联免疫吸附法(ELISA)
(1)适用范围:
粮食、花生及其制品、薯类、豆类、发酵食品及酒类等各种食品中黄曲霉毒素B1 的测定。
(2)实验原理:
试样中的黄曲霉毒素 B1经提取、脱脂、浓缩后与定量特异性抗体反应, 多余的游离抗体则与酶标板内的包被抗原结合, 加人酶标记物和底物后显色, 与标准比较测定含量 。
(3)实验仪器配置:
仪器 | 用途 |
天平 | 用于试样的称量 |
粉碎机 | 用于固体样品的粉碎。 |
振荡器/涡旋仪 | 用于样品试液的震荡混匀。 |
离心机 | 用于试样中物质的分离。 |
水浴锅/氮吹仪 | 用于样品的提取,起挥干浓缩作用 |
恒温培养箱 | 实验测定中的恒温孵育过程 |
微量移液器 | 用于实验测定过程中,试剂的移取。(单道 10μL~100μL、100μL~1000μL;多道300μL) |
酶标仪 | 用于试样和标准溶液中黄曲霉毒素B1的测定。 |
黄曲霉毒素B1 ELISA检测试剂盒 | 配合酶标仪使用,快速检测黄曲霉毒素B1 |
二、高效液相色谱法(HPLC)
(1)适用范围:
适用于大米、玉米、花生、杏仁、核桃、松子等食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定。
(2)适用原理:
试样经乙腈-水提取,提取液过滤后,经装有反向离子交换吸附剂的多功能净化柱,去除脂肪、蛋白质、色素及碳水化合物等干扰物质。净化液中的黄曲霉毒素以三氟乙酸衍生,用带有荧光检测器的液相色谱系统分析,外标法定量。
(3)实验仪器配置:
仪器 | 用途 |
粉碎机 | 样品制备阶段,用于固体样品的粉碎 |
天平 | 样品的提取过程和试剂的准备过程中,用于样品和试剂的称量 |
电动振荡器 | 用于试样的提取过程,加快试样的提取。 |
多功能净化柱 | 用于试样的净化 |
真空吹干机 | 加快样品的浓缩,主要用于试样衍生化阶段,可被水浴氮吹仪替代 |
干燥箱 | 用于试样的衍生化过程,提供衍生环境 |
离心机 | 样品分离,用于试样的衍生化过程 |
漩涡混合器 | 样品的混匀,用于试样的衍生化过程 |
移液器 | 试剂的移取,用于标准品的制备和试样的衍生化过程 |
高效液相色谱系统 | 附荧光检测器,用于样品和标准品的测定 |
低温冰箱 | 用于标准储备液、标准工作液的低温储存 |
纯水机/超纯水机 | 提供实验室用水 |
三、薄层色谱法(TCL)
(1)适用范围:
粮食、花生及其制品、薯类、豆类、发酵食品及酒类等各种食品中黄曲霉毒素B1 的测定。
(2)适用原理:
试样经提取、浓缩、薄层分离后,在365nm紫外光下,黄曲霉毒素B1产生蓝紫色荧光,根据其在薄层板上显示的荧光的最低检出量来定量。
(3)实验仪器配置:
仪器 | 实验用途 |
小型粉碎机 | 固体样品的制备中用于粉碎样品 |
样筛 | 样品制备过程,筛选目标大小的物质 |
天平 | 用于样品和试剂的称量 |
振荡器 | 用于样品试液的提取,加快提取速率 |
水浴锅 | 恒温加热,其干燥浓缩作用,用于样品的提取 |
通风柜 | 为水浴浓缩过程提供通风环境(可不使用) |
全玻璃浓缩蒸馏器 | 用于样品的提取,起干燥浓缩作用 |
玻璃板(5cm×20cm) | 用于薄层板的制备 |
薄层板涂布器 | 用于薄层板的制备 |
展开槽 | 用于实验中样品的展开 |
紫外光灯 | 100~125W,带有波长365nm滤光片。用于实验中样品的观察 |
微量注射器(或血色素吸管) | 用于实验测定中样品的移取(50ul) |