序号 | 实验项目 | 操作内容 | 注意事项 |
1 | 样品制备 | 选取有代表性的样品用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过20目筛，置于密闭样品袋中，阴凉处保存，备用。 | 试样勿吸潮变质。 |
2 | 样品脱脂 | 称取4g试样于滤纸筒中，用FOSS 索式提取系统按粗脂肪检测方法进行，脱脂后的样品只需在室温风干，去掉石油醚即可。 | 含脂肪小于1%可不脱脂；含脂肪1%～10%建议脱脂；含脂肪大于10%则应脱脂。 |
3 | 胃蛋白酶消化 | 称取已脱脂风干后的试样1.0000g(精确至±0.010g)于250 ml干燥的带盖磨口瓶中,加150 ml新配制的并已预热至42℃～45℃的胃蛋白酶溶液,盖紧瓶盖,将瓶夹于恒温摇床上,于45℃、80 r/min恒定速度搅动16小时进行保温酶解消化。 | （1） 应确保磨口瓶中样品完全被胃蛋白酶溶液浸湿。 |
（2） 同时做酶液空白测定（即不加试样，其它步骤一样） |
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4 | 消化残渣的处理 | 从搅动器上取下磨口瓶，呈45°角放置，让残渣沉淀15min以上，随后在铺有滤纸的布氏漏斗上抽滤，先用少量水将瓶盖上的残渣洗至滤纸，再将磨口瓶保持沉淀时的角度移至布氏漏斗上，慢慢倾出内容物，使之通过滤纸后形成连续的细流，避免任何不必要的搅动。 | （1） 先过上层清液，液体通过滤纸的速度应与倾入的速度相同。 |
（2） 过滤过程要小心操作，保证残渣毫无损失。 |
| 当上层液体通过滤纸后，于瓶中加入15ml丙酮，用拇指盖住瓶口剧烈振摇，放开。再用拇指堵住瓶口，在滤纸上方将瓶倒置振摇，放开拇指，丙酮和残渣流到滤纸上。再用一份15ml的丙酮进行洗涤，照上法振摇和倒出。检查瓶子，并用丙酮再次洗涤。当全部液体通过滤纸后,用洗瓶以少量丙酮洗涤漏斗壁上残渣两次,并抽干。从布氏漏斗上小心取下载有残渣的滤纸(用滤纸将残渣包裹好),无损地移入100烧杯中并置于105℃烘箱内烘干。 | 磨口瓶内的残渣要全部冲洗至滤纸上。 |
5 | 粗蛋白质的测定 | 将上述已烘干的滤纸包无损地移入凯氏烧瓶中，按《FOSS 定氮仪测定饲料中粗蛋白含量的方法》测定残渣粗蛋白质的质量分数（ω2）。同时，称取脱脂风干的样品0.3 g（精确至0.0002 g），直接按《FOSS 定氮仪测定饲料中粗蛋白含量的方法》测定脱脂未酶解的样品中粗蛋白质的质量分数（ω1）。 | 测定残渣粗蛋白质时应从每个样品残渣粗蛋白质中减去酶液的空白值。 |
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6 | 计算 | 
| X- 试样胃蛋白酶消化率，以质量分数计（%）； |
ω1- 脱脂未酶解的样品中粗蛋白质的质量分数（%）； |
ω2- 脱脂酶解后的残渣中粗蛋白质的质量分数（%）。 |