微生物限度检查SOP

微生物限度检查SOP

1.适用范围：适用于各品种微生物限度检查。

1.  职责

检验员：严格按SOP进行检验。

QC主管：监督检查执行情况。

2.  定义

2.1.    微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及原、辅料、包材受到微生物污染程度的一种检查方法，包括染菌量及控制菌的检查。

3.  微生物限度检查的一般要求

4.1环境要求    微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。

4.2.供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物的生长和存活无影响。

4.3培养温度要求    除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃；控制菌培养温度为35～37℃。

4.4检验结果报告单位   检验结果以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告，包材按相应质量标准的规定进行。

4.5抽样和样品保存

4.5.1.按批号随机抽样，抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。

4.5.2.抽样时，凡发现有异常或可疑的样品，选取有疑问的样品，但机械损伤、明显破裂的包装不得作为样品。

4.5.3凡能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出长螨、发霉、虫蛀及变质的药品可直接判为不合格品，无须再抽样检验。

4.5.4.供试品在检验之前，保存于阴凉干燥处，勿冷藏或冷冻。

4.5.5.供试品在检验之前，保持原包装状态，严禁开启，并保存在阴凉干燥处（勿冷藏或冷冻）。已开启样品不得作为供试品。

4.6. 主要仪器及器具

恒温培养箱、生化培养箱、恒温水浴锅、电冰箱、超净工作台、生物显微镜、放大镜、电热恒温干燥箱、电热压力消毒器、药物天平、锥形瓶、研钵、培养皿（9cm）、量筒（100ml）、试管（18×180mm）、吸管（1ml）、棉塞、接种针、记号笔。

5.检验量

5.1检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或cm2））

5.2所有剂型的检验量均需取2个以上包装单位。固体及粘稠性供试品的检验量为10g，液体制剂检验量为10ml；中药膜剂为50cm2；贵细药品、微量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加10g或10ml。包材检验量按相应质量标准的规定进行。

6. 操作方法

6.1.试验前准备

6.1.1.将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、匀浆杯、试管、量筒、吸管（1ml、10ml）、稀释剂等移至操作室内。准备好足够用量，避免操作中出入操作间。

6.1.2.开启无菌室紫外杀菌灯和洁净工作台的空气过滤装置30min。

6.1.3.操作人员用肥皂洗手，关闭紫外杀菌灯，进入缓冲间，换工作鞋，用消毒液洗手或用乙醇棉球擦手，穿戴好无菌衣、帽、口罩、手套等。

6.1.4.操作前先用乙醇棉球擦手、工作台面，再用乙醇棉球擦拭供试品瓶、盒、袋等的开口处周围，待干后用灭菌剪刀或镊子将供试品启封。

6.1.5. 供试品制成供试液后，在1小时内注皿操作完毕。

6.2.供试液的制备

6.2.1.根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。除另有规定外，常用的供试液制备方法如下。

6.2.1.1.液体供试品

取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。油剂可加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。

6.2.1.2.固体、半固体或粘稠性供试品

取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，用匀浆仪或其他适宜的方法，混匀，作为1：10的供试液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。

6.2.1.3.需用特殊供试液制备方法的供试品

6.2.1.4.非水溶性供试品

方法1  取供试品5g（或5ml），加至含溶化的（温度不超过45℃）5g司盘80、3g单硬脂酸镁甘油酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45℃的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加边搅拌，使供试品充分乳化，作为1：20的供试液。

方法2  取供试品10g，加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯（制法见附录XIII B无菌检查法中供试品的无菌检查项下）和无菌玻璃珠的适宜容器中，必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量，充分振摇，使供试品溶解。然后加入45℃的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，振摇5～10分钟，萃取，静置使油水明显分层，取其水层作为1：10的供试液。

6.2.1.5.膜剂供试品

  取供试品50cm2,剪碎，加50ml或100ml的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（必要时可增加稀释液），浸泡，振摇，作为1：10或1：20的供试液。

6.2.1.6.肠溶及结肠溶制剂供试品

  取供试品10g，加pH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于结肠溶制剂）至100ml，置45℃水浴中，振摇，使溶解，作为1：10的供试液。

6.2.1.7.气雾剂、喷物剂供试品

  取规定量供试品，置冰冻室冷冻约1小时，取出，迅速消毒供试品开启部位，用无菌钢锥在该部位钻一小孔，防至室温，并轻轻转动容器，使抛射剂缓缓全部释出。用无菌注射器吸出全部药液，加至适量的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（若含非水溶性成分，加适量的无菌聚山梨酯80）中，混匀，取相当于10g或10ml的供试品，再稀释成1：10的供试液。

6.2.1.8.具抑菌活性的供试品

当供试品有抑菌活性时，应消除供试液的抑菌后，在依法检查，常用的方法如下。

●培养基稀释法  取规定量的供试液，至较大量的培养基中，使单位体积内的供试品含量减少，至不含抑菌作用。测定细菌、霉菌及酵母的菌数时，取同稀释级的供试液2ml每1ml供试液可等量分注多个平皿，倾注琼脂培养基，混匀，凝固，培养，计数。每1ml供试液的平均菌落数，按平皿法计数规则报告菌数；控制菌检查时，可加大增菌培养基的用量。

离心沉淀集菌法  取一定量的供试液，3000转/分离心20分钟（供试液如有沉淀，先以500转/分离心5分钟，取全部上清液再离心），弃取上清液，留底部集菌液约2ml，加稀释液补至原量。

●薄膜过滤法   见细菌、酶菌及酵母菌计数项下的“薄膜过滤法”

●中和法  凡含汞、砷或防腐剂等具有抑菌作用的供试品，可用适宜的中和剂或灭和剂消除其抑菌成分。中和剂或灭活剂可加在所用的稀释液或培养基中。

7.细菌、霉菌及酵母菌检查

7.1计数方法和计数方法的验证

7.1.1当建立药品的微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌的测定。若药品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。

验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行，对各试验菌的回收率应逐一的进行验证。

7.1.2.菌种  验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。

大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B) 44  102]

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B)26 003]

枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B) 63 501]

白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC(F) 98  001]

黑曲酶（Aspergillus niger）[CMCC(F) 98  003]

7.1.3.菌液制备  接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中，培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁培养琼脂斜面培养基中，培养24～48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu的菌悬液。接种黑曲酶的新鲜培养物至改良马丁培养琼脂斜面培养基中，培养5～7天，加入3-5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能通过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液。

7.1.4..验证方法  验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。

7.1.4.1.试验组  平皿法计数时，取试验可能用的最低稀释级供试液1ml和50～100cfu试验菌，分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。薄膜过率法计数时，取规定量试验可能用的最低稀释剂供试液，过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入50～100cfu试验菌，过滤，按薄膜过滤法测定其菌数。

7.1.4.2.菌液组  测定所加的试验菌数。

7.1.4.3.供试品对照组  取规定量的供试液，按菌落计数方法测定供试品本底菌数。

7.1.4.4.稀释剂对照组  若供试液制备需要分散、乳化，中和、离心或薄膜过滤等待处理时，应增加稀释剂对照组，以考察供试液替代供试验品，加入试验菌，使最终菌浓度为每1ml供试液含50～100cfu，按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。

7.1.5.结果判断  在3次独立的平行试验中，稀释剂对照的菌回收率（稀释剂对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率）应均不低于70%，若试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率）均不低于70%，照该供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数；若任一次试验中试验组的菌回收率低于70%，应采用培养基稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证。

7.1.6.验证试验也可与供试品的细菌、霉菌及酵母菌计数同时进行。

7. 2.检查法

计数方法包括平皿法和薄膜过滤法。检查时，按验证的计数方法进行供试品的细菌、霉菌及酵母菌菌数的测定。

  取按验证的方法制备的均匀供试液，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释成1：10、1：102、1：103等稀释级。

7.2.1.平皿法

7.2.1.1采用平皿法进行菌数测定时，应取适宜的连续2～3个稀释剂的供试液。

7.2.1.2.取供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每稀释级每种培养基至少制备2个平板。

7.2.1.3.阴性对照试验    取试验用的稀释液1ml，置无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养，每种用的培养基各制备2个平板，均不得有菌生长。

7.2.1.4.培养和计数    除另有规定外，细菌培养48小时，逐日点计技能落数，一般以48小时的菌落数报告；霉菌、酵母菌培养72小时，逐日点计菌落数，有般以72小时的菌落数报告；必要时可适当延长培养时间5～7天进行菌落计数并报告。菌落蔓延生长成片的平板不适宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。若同稀释级两个平板的菌落平均数不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍以上。

7.2.1.5.一般营养琼脂培养基用于细菌计数；玫瑰红钠琼脂培养基用于霉菌及酵母菌计数；酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂基于霉菌及酵母菌计数。在特殊情况下，若营养琼脂基上长有霉菌和酵母菌、玫瑰红钠琼脂培养培养基上长有细菌，则应分别点计霉菌和酵母菌、细菌菌落数。然后将营养琼脂培养基上的霉菌和酵母菌数或玫瑰红钠琼脂培养基上的细菌数，与玫瑰红钠琼脂培养基中的霉菌和酵母菌数或营养琼脂基中的细菌数进行比较，以菌落数高的培养基中的菌数为计数结果。

7.2.1.6.含蜂蜜、王浆的液体制剂，用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌数，用酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基测定酵母菌数，合并计数。

7.2.1.7.菌数报告规则  宜选取细菌、酵母菌平均菌落数在30～300之间、，霉菌平均菌落数在30～100之间的稀释级。作为菌数报告（取两位有效数字）的依据。

当仅有1个稀释级的菌落数符合上述规定，以该级的平均菌落数乘一稀释倍数的值报告菌数。

7.2.1.8.当同时有2个稀释级的菌落数符合上述规定时，视两者比值（比值为高稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值除以低稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值）而定。若比值不大于2，以两稀释级的菌落数乘以稀释倍数的均值报告菌数；若比值大于2而不超过5时，以低稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数；当出现比值大于5，或高稀释级的菌落数大于或等于低稀释级的菌落数等异常情况时，应查明原因再进行检查，必要时，应进行方法的重新验证。

7.2.1.9.当各稀释级的平均菌落数均小于30，以最低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数。

7.2.1.10.如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数少于1时，以<1乘以最低稀释倍数的值报告菌落数。

7.2.2.薄膜过滤法

采用薄膜过滤法，滤膜孔径不大于0.45um，直径约为50nm。选择滤膜材质时应保证供试品及溶剂不影响微生物的充分被截留。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试品过滤前先将少量的冲洗液过滤以湿润滤膜。油类供试品，其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的最大过滤效率，应保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为100ml。每片滤膜的总过滤量不宜过大，以避免滤膜上的微生物受损伤。

7.2.2.2.取相当于每张滤膜含1g或1ml供试品的供试溶液，加至适量的稀释剂中，混匀，过滤。若供试品每1g或1ml所含的菌数比较多时，可取适量稀释级的供试液1ml，过滤。用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或其他适宜的冲洗液冲洗滤膜，冲洗方法和冲洗量同“计数方法的验证”。冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉

葡萄糖琼脂培养基平板上培养。每种培养基至少制备一张滤膜。

7.2.2.3.阴性对照品试验   取试验用的稀释液1ml照上述薄膜过滤法操作，作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。

7.2.2.4.培养和计数    培养条件和计数方法同平皿法，每片滤膜上的菌落数应不超过100个。

7.2.2.5. 菌数报告规则  以相当于1g或1ml供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌生长，以＜1报告菌数（每张滤膜过滤1g或1ml供试品），或＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。　

控制菌检查

8.控制菌检查方法和检查方法的验证

8.1当建立药品的微生物限度检查法时间，应进行控制菌检查方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的控制菌检查。若药品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，检查方法应重新验证。

8.1.1验证时，依各品种项下微生物限度标准中规定检查控制菌选择相应验证的菌株，验证大肠菌群检查法时，应采用大肠埃希菌检查法的规定及下列要求进行。

8.1.2.菌种  对试验菌种的要求同细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证。

大肠埃希菌（Esherichia coli）[CMCC(B)  44  102]

金黄色葡萄球菌（ Staphylococcus）  [CMCC(B)26 003

乙型付伤寒沙门菌（Salmonella  paratyphi  B）[CMCC(B) 50  094]

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC (B) 10  104]

生孢梭菌（Clostridium  sporogenes）[CMCC(B) 64  941]

8.1.3.菌液制备  接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型付伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中，培养18～24小时。用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为10～100cfu的菌悬液。

8.1.4.验证方法

8.1.4.1.试验组  取规定量供试液及10～100cfu试验菌加入增菌培养基中，依相应控制菌检查法进行检查。当采用薄膜过滤法时，取规定量液，过滤，冲洗，试验菌应加在最后一次冲洗液中，过滤后，注入增菌培养基或取出滤膜接入增菌培养基中。

8.1.4.2.阴性菌对照组  设立阴性菌对照组是为了验证该控制菌检查方法的专属性。方法同试验组，验证大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌检查法时的阴性对照菌采用金黄色葡萄球菌；验证铜绿假单细胞、金黄色葡萄球菌、梭菌检查法时的阴性对照菌采用大肠埃希菌。阴性对照菌不得检出。

8.1.4.3.结果判断

阴性菌对照组不得检出阴性对照菌。若试验组检出试验菌，按此供试液制备法和控制菌检查法进行供试品的该控制菌检查；若试验组未检出试菌，应采用培养基稀释法（供试品有抑菌作用，放大培养基量，由1：100放大为1：300、1：500或1：1000，由于盛放培养基容器体积有限，一般放大到500ml或1000ml，本法适用于抑菌作用不强的供试品）、离心沉淀集菌法（取规定量的供试液，如供试液含许多药渣，先以低速500r/min离心10-30min，取下面1ml液体，并将适量的稀释剂洗涤液一并移入同瓶增菌液中，培养。适用于中度抑菌的供试品）、薄膜过滤法（取规定量的供试液，过滤，冲洗，试验菌应加在最后一次冲洗液中，过滤后，注入培养基或取出滤膜接入增菌培养基中）、中和法（常用的中和剂有：磺胺类药物加入适当的对氨基苯甲酸；含重金属的药物在培养基内加入巯基化合物如硫乙醇酸钠-半胱氨酸；洗必泰制剂加入聚山梨酸80（3%）或卵磷脂（3%）；卤素中加入硫代硫酸钠（0.1%）。）等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证。验证试验也可与供试品的控制菌检查同时进行。

8.1.4.5.验证试验也可与供试品的控制菌检查同时进行

8.2.检查法

供试品的控制菌检查应按已验证的方法进行，增菌培养基的实际用量同控制菌检查方法的验证。

8.2.1.阳性对照试验   供试品进行控制菌检查时，应做阳性对照实验。阳性对照试验的加菌量为10～100cfu,方法同供试品的控制菌检查。阳性对照试验应检出相应的控制菌。

8.2.2.阴性对照试验   取稀释液10ml照相应控制菌检查法检查，作为阴性对照。阴性对照应无菌生长。

8.2.3.大肠埃希菌（Escherichia coli）检查    取供试液10ml（相当于供试品1g、1ml、10cm2），直接或处理后接种至适量（不少于100ml）的胆盐乳糖培养基中，培养18～24小时，必要时可延长至48小时。

取上述培养物0.2ml,接种至含5ml MUG培养基的试管内，培养，于5小时、24小时在366nm紫外线下观察，同时用未接种的MUG培养基作本底对照。若管内培养物呈现荧光，，为MUG阳性；不呈现荧光，为MUG阴性。观察后，沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液，液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈试剂本色，为靛基质阴性。本底对照应为MUG阴性和靛基质阴性。

如MUG阳性、靛基质阳性，判供试品检出大肠埃希菌；如MUG阴性、靛基质阴性，判供试品未检出大肠埃希菌；如MUG阳性，靛基质阴性，或MUG阴性、靛基质阳性，则应取胆盐乳糖培养基的培养物划线接种于曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基的平板上，培养18～24小时。

若平板上无菌落生长、或生长的菌落与表1所列的菌落形态特征不符，判供试品未检出大肠埃希菌。若平板上生长的菌落与表1所列的菌落形态特征相符或疑似，应进行分离、纯化、染色镜检和适宜的生化试验，确认是否为大肠埃希菌。

表1  大肠埃希菌菌落形态特征

8.2.4.大肠菌群（Coliform）检查       取含适量（不少于10-ml）的胆盐乳糖发酵培养基管3支，分别加入1：10的供试液1ml（含供试品0.1g或0.1ml），1：100的供试液1ml（含供试品0.01g或0.01ml），1：1000的供试液1ml（含供试品0.001g或0.001ml），另取1支胆盐乳糖发酵培养基管加入稀释液1ml作为阴性对照管，培养18～24小时。

胆酸乳糖发酵管若无菌生长、或有菌生长但不产酸产气，判该管未检出大肠菌群；若产酸产气，应将发酵管中的培养物分别划线接种于曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康琼脂培养基的平板上，培养18～24小时。

若平板上无菌落生长，或生长的菌落与表2所列的菌落形态特征不符或为非革兰阴性无芽孢杆菌，判该管未检出大肠菌群；若平板上生产的菌落与表2所列的菌落形态特征相符合或疑

似，且为革兰阴性无芽孢杆菌，应进行确证试验。

表2  大肠菌群菌落形态特征

确证试验  从上述分离平板上挑选4～5个疑似菌落，分别接种与乳糖发酵管中，培养24～48小时，若产酸产气，判该胆盐乳糖发酵管检出大肠菌群，否则判未检出大肠菌群。

根据大肠菌群的检出管数，按表3报告1g或1ml供试品中的大肠菌群数。

表3  可能的大肠菌群数表

注：+代表检出菌群；－代表未检出大肠菌群

8.2.4.沙门菌（Salmonella） 检查     取供试品10g或10ml，直接或处理后接种至适量（不少于200ml）的营养肉汤培养基中，用匀浆仪或其他适宜方法混匀，培养18～24小时。

取上述培养物1ml，接种于10ml四硫磺钠亮绿培养基中，培养18～24小时（必要时延长至40～48小时）。若平板上无菌生长，或生长的菌落不同于表4所列的特征，判供试品未检出沙门菌。

若平板上生长的菌落数与表4所列的菌落形态特征相符或疑似，用接种针挑选2～3个菌落分别于三糖铁琼脂培养基高层斜面和高层穿刺接种，培养18～24小时，如斜面未见红色、底层无黑色，判供试品未检出沙门菌，否则，应取三糖铁琼脂培养基斜面的培养物进行适宜的生化试验或血清凝集试验，确认是否为沙门菌。

                           表4  沙门菌菌落形态特征

8.2.5.铜绿假单细胞（Pseudomonas aeruginosa） 检查   取供试液10ml（相当于供试品1g、1ml、10cm2）,直接或处理后接种至适量（不少于100ml）的胆盐乳糖培养基中，培养18～24小时。取上述培养物，划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基的平板上，培养18～24小时。

铜绿假单细胞菌典型菌落呈扁平、无定形、周边扩散、表面湿润，灰白色，周围时有蓝绿色素扩散。如平板上无菌落生长或生长的菌落与上述菌落形态特征不符，判供试品未检出铜绿假单胞菌。如平板生长的菌落与上述菌落形态特征相符或疑似，应挑选2～3个菌落，分别接种于营养琼脂培养基斜面上，培养18～24小时。取斜面培养物进行革兰染色、镜检及氧化酶试验。

氧化酶试验  取洁净滤纸片置于平皿内，用无菌玻棒取斜面培养物涂于纸片上，滴加新配制的1%二盐酸二甲基对苯二胺试液，在30秒内若培养物呈粉红色并逐见变为紫红色为氧化酶试验阳性，否则为阴性。

若斜面培养物为革兰阴性无芽孢杆菌或氧化酶试验阴性，均判供试品未检出铜绿假单胞菌。否则，应 进行绿脓菌素试验。

绿脓菌素（Pyocyanin）试验  取斜面培养物接种于PDP琼脂培养斜面上，培养24小时，加三氯甲烷3～5ml至培养管中，搅碎培养基并充分振摇，静置片刻，将三氯甲烷相移至另一试管中，加入1mol/L盐酸试液1ml，振摇后，静置片刻，观察。若盐酸溶液显粉红色，为绿脓菌素试验阳性，否则为阴性，同时用未接种的PDP琼脂培养基斜面同法作阴性对照，阴性对照试验应呈阴性。

若上述疑似菌为革兰阴性杆菌、氧化酶试验阳性及绿脓菌素试验阳性，判供试品检出铜绿甲单细胞菌。若上述疑似菌为革兰阴性杆菌、氧化酶试验阳性及绿脓菌素试验阴性，应继续进行适宜的生化试验，确认是否为铜绿假单胞菌。

8.2.5.金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）检查   取供试液10ml（相当于供试品1g、1ml、10cm2）。直接或处理后接种至适量（不少于100ml）的亚碲酸钠（钾）肉汤（或营养肉汤）培养基中，培养18～24小时，必要时可延长至48小时。取上述培养物，划线借种于卵黄氯化钠琼脂培养基或甘露醇氯化钠琼脂培养基的平板上，培养24～72小时。若平板上无菌落生

长或生长的菌落不同于表5所列特征，判供试品未检出金黄色葡萄球菌。

表5  金黄色葡萄球菌菌落形态特征

若平板上生长的菌落与表5所列的菌落特征相符或疑似，应挑选2～3个菌落，分别接种于营养琼脂培养基斜面上，培养18～24小时。取营养琼脂培养基的培养物进行革兰染色，并接种于营养肉汤培养基中，培养18～24小时，作血浆凝固酶试验。

血浆凝固酶试验   取灭菌小试管3支，各加入血浆和无菌水混合液（1：1）0.5ml，再分别加入可疑菌株的营养肉汤培养基（或由营养琼脂培养基斜面培养物制备的浓菌悬液）0.5ml、金黄色葡萄球菌营养肉汤培养物（或由营养琼脂培养基斜面培养物制备的浓菌悬液）0.5ml，即为试验管、阳性对照管和阴性对照管。将3管同时培养，3小时后开始观察直至24小时。阴性对照管的血浆应流动自如，阴性对照管血浆应凝固，若试验管血浆凝固者为血浆凝固酶试验阳性，否则为阴性。如阳性对照管或阴性对照管不符合规定时，应另制备血浆，重新试验。

若上述疑似菌为非革兰阳性球菌、血浆凝固酶试验阴性，判供试品未检出金黄色葡萄球菌。

8.2.6梭菌（clostrdium）检查    取供试液10ml（相当于供试品1g、1ml）2份，其中1份置80℃保温10分钟后迅速冷却。上述2份供试液直接或处理后分别接种至100ml的0.1%新鲜庖肉培养基中。各培养基管在厌氧条件下培养72～96小时。如试验管不出现浑浊、产气、消化碎肉、臭气等现象，判供试品未检出梭菌；否则，应取上述培养物0.2ml，涂抹接种于含庆大霉素的哥伦比亚琼脂培养基平板上，在厌氧条件下培养48～72小时。若平板上无菌落生长，判供试品未检出梭菌；若平板上有菌落生长，应挑选2～3个菌落分别进行革兰染色和过氧化氢酶试验。

过氧化氢酶试验  取上述平板上的菌落，置洁净玻片上，滴加3%过氧化氢试液，若菌落表面有气泡产生，为过氧化氢酶试验阳性，否则为阴性。

若上述可疑菌落为革兰阳性梭菌，有或无卵圆形或球形的芽孢，过氧化氢酶阴性，判供试品检出梭菌，否则判供试品未检出梭菌。

9.微生物限度检查结果判断

9.1.供试品检出控制或其他治病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。

9.2.供试品的细菌数、霉菌和酵母菌数其中任何一项不符合该品种项下的规定，应从同一批样品中随机抽样，独立复试两次，以3次结果的平均值报告菌数。

9.3.眼用制剂检出霉菌和酵母菌数时，须以两次复试结果均不得长菌，方可判供试品的霉菌和酵母菌数符合该品种项下的规定。

9.4.若供试品的细菌数、霉菌和酵母菌数、控制菌三项检验结果均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若其中任何一项不符合该品种项下的规定。判供试品不符合规定。

10.稀释液

稀释液配制后，应采用验证合格的灭菌程序灭菌。

10.1.PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液  取磷酸二氢钾3.56 g，磷酸氢二钠7.23 g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。

10.2.PH6.8无菌磷酸盐缓冲液、Ph7.6无菌磷酸盐缓冲液按缓冲液（附录XV D）配制后，过滤，分装，灭菌。

如需要，可在上述稀释液灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。

9.5.3.  0.9%无菌氯化钠溶液   取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000ml，过滤，分装、灭菌。

11.培养基及其制备方法

  培养基可按以下处方制备，也可使用按该处方生产的符合要求的脱水培养基。配制后，应采用验证合格的灭菌程序灭菌。

11.1.营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基及改良马丁琼脂培养基照无菌检查法（附录XIII B）制备。

11.2.玫瑰红钠琼脂培养基

胨                 5.0g               玫瑰红钠                  0.0133g

葡萄糖             10.0g              琼脂                      14.0g

磷酸二氢钾         1.0g               水                        1000ml

硫酸镁             0.5g

除葡萄糖、玫瑰红钠外，.取上述成分，混合，微温溶解，滤过，加入葡萄糖、玫瑰红钠，分装，灭菌。

11.3.酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基（YPD）

胨                 10.0g              琼脂                     14.0g  

酵母浸出粉         5.0g               水                       1000ml

葡萄糖             20.0g

除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，加入葡萄糖，分装，灭菌。

11.4.胆盐乳糖培养基（BL）

胨                 20.0g              磷酸二氢钾               1.3g

乳糖               5.0g               牛胆盐                   2.0g

氯化钠             5.0g              （或去氧胆酸钠）          (0.5g)

磷酸氢二钾         4.0g               水                       1000ml

   除乳糖、牛胆盐（或去氧胆酸钠）外，取上述成分，混合，微温溶解调节Ph值使灭菌后为7.4±0.2，煮沸，滤清，加入乳糖、牛胆盐（或去氧胆酸钠），分装，灭菌。

115.胆盐乳糖发酵培养基

取未灭菌的胆盐乳糖培养基1000ml，加入0.04%溴甲酚紫指示液25ml，根据要求的用量分装于含倒管的试管中。灭菌。所用倒管的规格应保证产气结果的观察。

11.6.曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB）

营养琼脂培养基      100ml               曙红钠指示液            2ml

20%乳糖溶液        5ml                 亚甲蓝指示液            1.3～1.6ml

   取营养琼脂培养基，加热溶化后，冷至60℃，按无菌操作加入灭菌的其他3种溶液，摇匀，倾注平皿。

11.7.麦康凯琼脂培养基（MacC）

胨                 20.0g                     1%中性红指示液             3ml

乳糖               10.0g           琼脂                       14.0g

牛胆盐             5.0g            水                         1000ml

氯化钠             5.0g

   除乳糖、1%中性红指示液、牛胆盐   及琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，灭菌，冷至约60℃，倾注平皿。

11.8.  4-甲基伞形酮葡糖苷酸（4-methylumbellifery-β-D-glucuronide,MUG）培养基

胨10.0g磷酸二氢钾(无水)0.9g

硫酸锰             0.5mg            磷酸二氢钠(无水)         6.2g

硫酸锌             0.5mg            亚硫酸钠                40mg

硫酸镁             0.1g             去氧胆酸钠              1.0g

氯化钠             5.0g             MUG                   75mg

氯化钙             50mg            水                      1000ml

   除MUG外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1，加入MUG，溶解，每管分装5ml，灭菌。

11.9. 三糖铁琼脂培养基（TSI）

胨                 20.0g               硫酸亚铁               0.2g

牛肉浸出粉         5.0g                硫代硫酸钠             0.2g

乳糖               10.0g               0.2%酚磺酞指示液       12.5ml

蔗糖               10.0g              琼脂                    12.0g

葡萄糖             1.0g               水                      1000ml

氯化钠             5.0g

   除三种糖、0.2%酚磺酞指示液、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，灭菌，制成高底层（2～3cm）短斜面。

11.10.四硫磺酸钠亮绿培养基（TTB）

胨                 5.0g               硫代硫酸钠              30.0g

牛胆盐             1.0g               水                      1000ml

碳酸钙             10.0g

取上述成分，混合，微温溶解，灭菌

临用前，取上述培养基，每10ml加入碘试液0.2ml和亮绿试液0.1ml，混匀。

11.11沙门、志贺菌属琼脂培养基（SS）
胨                5.0g               硫代硫酸钠                8.5g

牛肉浸出粉        5.0g               中性红指示液              2.5ml

乳糖              10.0g              亮绿试液                  0.33ml

牛胆盐            8.5g               琼脂                     16.0g

枸橼酸钠          8.5g               水                       1000ml

枸橼酸铁铵        1.0g

   除乳糖、中性红指示液、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节PH值使灭菌后为7.2+0.1，滤过，加入琼脂，加热熔化后，再加入其余各成分，摇匀，灭菌，冷至60℃，倾注平皿。

11.12.胆盐硫乳琼脂培养基（DHL）

胨                20.0g              枸橼酸钠                   1.0g

牛肉浸出粉        3.0g               枸橼酸铁铵                 1.0g

乳糖              10.0g              中性红指示液               3ml

蔗糖              10.0g              琼脂                       16.0g

去氧胆酸钠        1.0g               水                         1000ml

硫代硫酸钠        2.3g

   除糖、指示液及琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节PH值使灭菌后为7.2+0.1，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余成分，摇匀，冷至60℃，倾注平皿。

11.13.溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基

胨              10.0g                   溴化十六烷基三甲铵        0.3g

牛肉浸出粉      3.0g                    琼脂                      14.0g

氯化钠          5.0g                    水                        1000ml

除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节PH值使灭菌后为7.5+.01，加入琼脂，加热融化后，分装，灭菌，冷至60℃，倾注平皿。

11.14.亚碲酸盐肉汤培养基

临用前，取灭菌的营养肉汤培养基，每100ml中加日4新配制的1%亚碲酸钠（钾）试液0.2ml，混匀，即得。

11.15卵黄氯化钠琼脂培养基

胨              6.0g                   10%氯化钠卵黄液          100 ml

牛肉浸出粉      1.8g                    琼脂                     14.0g

氯化钠          30.0g                    水                     650ml

除10%氯化钠卵黄液外，取上述成分，混合，微温溶解，调节PH值使灭菌后为7.6+0.1，灭菌 ，待冷至约60℃，以无菌操作加入10%氯化钠卵黄液，充分振摇倾注平皿。

   10%氯化钠卵黄液的制备   取新鲜鸡蛋1个，以无菌操作取出卵黄，放入10%无菌氯化钠溶液100ml中，充分振摇，即得。

11.16.甘露醇氯化钠琼脂培养基

胨              10.0g                   酚磺酞指示液           2.5ml

牛肉浸出粉      1.8g                    琼脂                   14.0g

甘露醇          10.0g                   水                     1000ml

氯化钠          75.0g

  除甘露醇、酚磺酞指示液及琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节PH值使灭菌后为7.4+0.2，加入琼脂，加热溶化后，滤过，分装，灭菌，冷至60℃，倾注平皿。

11.17.乳糖发酵培养基

胨                      20.0g           乳糖                   10.0g

0.04%溴甲酚紫指示液     25ml           水                     1000ml

   除0.04%溴甲酚紫指示液外，取上述成分，混合，微温溶解，调节PH值使灭菌后为7.2+

0.2，加入指示液，分装于含倒管的小试管中，每管3ml。灭菌。

11.18.绿脓菌素（Pyocyanin）测定用培养基（PDP琼脂培养基）

胨                      20.0g           甘油                   10ml 

氯化镁（无水）           1.4g            琼脂                   14.0g

硫酸钾（无水）           10.0g           水                     1000ml

  取胨、氯化镁、硫酸钾和水混合，微温溶解，调节PH值使灭菌后为7.3+0.1，加入甘油及琼脂，加热溶化，混匀，分装于试管，灭菌，置成斜面。

11.19.庖肉培养基

牛肉碎块的制备  取新鲜牛肉，除去脂肪和筋腱，加蒸馏水煮沸约10分钟，切成约5㎜3的小块，称重，按1：3（肉：水）加蒸馏水，置4～10℃浸18～20小时后，煮沸1小时，用白布过滤（滤液即为1：3牛肉浸液），肉渣用自来水漂洗2次，然后加入适量氢氧化钠溶液，搅拌，使PH在8.4左右，浸泡过液，次日倾去上层水，用蒸馏水冲洗2～3次，放在纱布上，自动沥干（不要挤压）。将肉渣铺在搪瓷盘上，于80～100℃烘干，筛去碎屑，装瓶，保持干燥，备用。

   庖肉培养基的制备  将上述碎肉块装入合适的容器中，再加入营养肉汤培养基，碎肉的量约为1.5%，调节PH使灭菌后为7.3+0.1。灭菌。

11.20..哥伦比亚琼脂培养基

酪蛋白胰酶消化物       10.0g            肉胃酶消化物           5.0g

心胰酶消化物           3.0g             酵母浸出粉             5.0g

玉米点粉               1.0g             氯化钠                 5.0g

琼脂                   15.0g            水                    1000ml

   除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节PH值使灭菌后为7.3+0.2，加入琼脂，加热溶化，滤过，分装，灭菌，冷至45～50℃，加入相当于20mg庆大酶素的无菌硫酸庆大酶素，混匀，  倾注平皿。

12.试药

12.1.十四烷酸异丙Isopropyl  Myristate[C17 H34 O2=270.46]

   本品为无色液体。溶与乙醇、乙醚、丙酮、三氯甲烷或甲苯，不溶于水、甘油或丙二醇。约208℃分解。

12.2. 二盐酸二甲基对苯二酸 N，N-dimethyl-p-phenylenedia-mine dihydrochloride[C8H12N2·2HCI=209.12]

  本品为白色或灰白色结晶性粉末；置空气中色渐边暗；易吸潮，在水或乙醇中溶解。

12.3.溴化十六烷基三甲铵  Cetyl Trimethylammonium Bro-mide[C19H42BrN=364.46]

本品为白色结晶。在水中溶解，在乙醇中微溶，在乙醚中不溶。

12.4.中性红 Neutral Red[C15H17N4CI=288.78]

本品为深绿色或棕黑色粉末。在水或乙醇中溶解，

12.5.牛肉浸出粉  Beef Extracr Powder

本品为米黄色粉末，在水中溶解。

12.6牛胆盐  Ox  Bile  salt

本品为淡黄色或黄棕色粉末，味苦而甜，具吸湿性。在水或醇中易溶。

 甘露醇Mannitol[C6hH14O6=182.17]

本品为白色结晶；无臭。在水中溶解，在乙醇中微溶。

12.7  4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸4-Methylumbelliferyl-β-D-gluu-ronide,MUG[C18H16O9=376.3]

本品为白色针状结晶。在水、乙醇或乙醚中溶解。在稀氢氧化钠溶液中分解。

去氧胆酸钠  sodium  Deoxycholate[C24H39NaO4=414.56

  本品为白色结晶性粉末，味苦。易溶于水，微溶于醇，不溶于醚。

亚碲酸钠Sodium  Tellurite[Na2TeO3=221.58]本品为白色粉末。在热水中易溶，在水中微溶。

12.8.玫瑰红钠（四氧四碘荧光素钠）Rose  Bengal  sodium  salt[C20H2Cl4I4Na2O5=1017.6]

本品为棕红色粉末。在水中溶解，溶液呈紫色，无荧光；在硫酸中溶解，溶液为棕色。

12.9.单硬脂酸甘油酯Glycerol monosterte[C21H42O4=358.56]

本品为棕红色或黄色蜡状。在热有机溶剂或矿物油中溶剂或矿物油中溶解，在水中不溶，但与水能乳化。

12.10.枸橼酸钠Ammoninm Ferric Citrace[C6H5Na3O7·2H2O=294.10]

本品为棕红色或绿色鳞片或粉末。易潮解，见光容易还原成亚铁。在水中溶解，在醇或醚中不溶。

12.11.胰蛋白酶Tryptone

本品为米黄色粉末。在水中溶解

12.12硫酸锌Zinc Sulfate[ZnSO4·7H2O=287.56]

本品为白色结晶、颗粒或粉末、在水中易溶，在甘油中溶解，在乙醇中微溶。

12.13.硫酸锰Manganese Sulfate[MnSO4· H2O=169.02]

本品为粉红色结晶。在水中溶解，在乙醇中不溶。

12.14.酪蛋白胰酶消化物（胰酪胨或酪胨）

Pancreatic Digest of Casein

本品为黄色或浅黄色颗粒。以干酪素为原料经胰酶水解、活性碳脱色处理、精致而成。

13.试液

13.1二盐酸二甲基对苯二胺试液  取二盐酸二甲基对苯二胺试液0.1g，加水10ml，即得。需新鲜少量配制，于冷处避光保存，如试液变成红褐色，不可使用。

13.2亚碲酸钠（钾）试液  取亚碲酸钠（钾）0.1g，加新鲜煮沸后冷至50℃的水10ml使溶解。

13.3玫瑰红钠试液 取玫瑰红钠0.1g，加水使溶解成75ml。

13.4亮绿试液 取亮绿0.1g，加水100ml使溶解。

13.5盐酸试液  取盐酸8.4ml，加水使稀释成100ml。

13.6靛基质试液  取对二甲氨基苯甲醛5.0g，加入戊醇（或丁醇）75ml，充分振摇，使完全溶解后，再取浓盐酸25ml徐徐滴入，边加边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深，或取二甲氨基苯甲醛1.0g，加入95%乙醇95ml，充分振摇，使完全溶解后，取盐酸20ml徐徐滴入。

13.7碘试液  取碘6g与碘化钾5g，加水20ml使溶解。

13.8过氧化氢试液  取浓过氧化氢溶液（30%），加水稀释成3%的溶液。临用时新配。

14指示液

14.1中性红指示液  取中性红1.0g，研细，加95%乙醇60ml使溶解，再加水至100ml。

变色范围Ph6.8～8.0（红→黄）。

14.2亚甲蓝指示液  取亚甲蓝0.5g，加水使溶解成100ml。

14.3酚磺酞指示液  取酚磺酞1.0g，加1mol/L氢氧化钠溶液2.82ml，使溶解，再加水至100ml。

     变色范围pH6.8～8.4（黄→红）。

14.4溴甲酚紫指示液  取溴甲酚紫1.6g, 加95%乙醇使溶解成100ml。

     变色范围pH5.2～6.8（黄→紫）。

14.5曙红钠指示液  取曙红钠2.0g，加水使溶解成100ml。

15.微生物限度标准

非无菌药品的微生物限度标准是基于药品的给药途径和对患者健康潜在的危害以及中药的特殊性而制订的。药品的生产、贮存、销售过程中的检验，中药提取物及辅料的检验，新药标准制订，进口药品标准复核，考察药品质量及仲裁等，除另有规定外，其微生物限度均以本标准为依据。

我公司的微生物限度标准控制菌执行下列标准规定，细菌数、霉菌和酵母菌数内控标准一般按照法定标准的60%执行，祥见各原辅料、包装材料、中间体、成品质量标准。

15.1制剂通则、品种项下要求无菌的制剂及标示无菌的制剂  应符合无菌检查法规定。

15.2口服给药制剂

15.2.1不含药材原粉的制剂

     细菌数  每1g不得过1000个。每1ml不得过100个。

     霉菌和酵母菌数  每1g或1ml不得过100个。

大肠埃希菌  每1g或1ml不得检出。

15.2.2含药材原粉的制剂  

     细菌数  每1g不得过10000个（丸剂每1g不得过30000个）。每1ml不得过500个。

     霉菌和酵母菌数  每1g或1ml不得过100个。

大肠埃希菌  每1g或1ml不得检出。

     大肠菌群  每1g应小于100个。每1ml应小于10个。

15.2.3含豆豉、神曲等发酵成分的制剂

     细菌数  每1g不得过100 000个。每1ml不得过1000个。

     霉菌和酵母菌数  每1g不得过500个。每1ml不得过100个。

大肠埃希菌  每1g或1ml不得检出。

     大肠菌群  每1g应小于100个。每1ml应小于10个。

15.3局部给药制剂

15.3.1用于手术、烧伤或严重创伤的局部给药制剂       应符合无菌检查法规定。

15.3.2用于表皮或黏膜不完整的含药材原粉的局部给药制剂

细菌数  每1g或10cm2不得过1000个。每1ml不得过100个。

     霉菌和酵母菌数  每1g、1ml或10cm2不得过100个。

     金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌每1g、1ml或10cm2不得检出。

15.3.3用于表皮或黏膜完整的含药材原粉的局部给药制剂

细菌数  每1g或10cm2不得过10 000个。每1ml不得过100个。

     霉菌和酵母菌数  每1g、1ml或10cm2不得过100个。

     金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌  每1g、1ml或10cm2不得检出。

15.3.4眼部给药制剂

细菌数  每1g或1ml不得过10个。

     霉菌和酵母菌数  每1g或1ml不得检出。

     金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌每1g或1ml不得检出。

15.3.5耳、鼻及呼吸道吸入给药制剂

细菌数  每1g、1ml或10cm2不得过100个。

     霉菌和酵母菌数  每1g、1ml或10cm2不得过10个。

     金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌  每1g、1ml或10cm2不得检出。

大肠埃希菌  鼻及呼吸道吸入给药的制剂，每1g、1ml或10cm2不得检出。

15.3.6阴道、尿道给药制剂

细菌数  每1g或1ml不得过100个。

     霉菌和酵母菌数  每1g或1ml应小于10个。

     金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、梭菌  每1g或1ml不得检出。

15.3.7直肠给药制剂

细菌数  每1g不得过1000个。每1ml不得过100个。

     霉菌和酵母菌数  每1g或1ml不得过100个。

     金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌  每1g或1ml不得检出。

15.3.8其他局部给药制剂

细菌数  每1g、1ml或10cm2不得过100个。

     霉菌和酵母菌数  每1g、1ml或10cm2不得过100个。

     金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌  每1g、1ml或10cm2不得检出。

15.4含动物组织（包括提取物）及动物类原药材粉（蜂蜜、王浆、动物角、阿胶除外）的口服给药制剂  每10g或10ml还不得检出沙门菌。

15.5有兼用途径的制剂  应符合各给药途径的标准。

15.6霉变、长螨者  以不合格论。

15.7中药提取物及辅料  参照相应制剂的微生物限度标准执行。