抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90%或高于估计效价的110%时，应调整其估计效价，重新试验。
第一法 管碟法
本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
菌悬液的制备
所需菌悬液有：枯草芽孢杆菌悬液、短小芽孢杆菌悬液、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌悬液、大肠埃希菌悬液、啤酒酵母菌悬液、肺炎克雷伯菌悬液、支气管炎博德特菌悬液，根据15版《中国药典》菌液的制备，使用适宜的培养箱，在适宜的温度（一般在32-35,35-37℃）下进行培养并洗脱，储存备用。
标准品溶液的制备 标准品的使用和保存，应照标准品说明书的规定。临用时照表1 的规定进行稀释。标准品的品种、分子式及理论计算值见表2。
供试品溶液的制备 精密称/量取供试品适童，用各品种项下规定的溶剂溶解后，再按估计效价或标示量照表1 的规定稀释至与标准品相当的浓度。
双碟的制备 取直径约90mm，高16-17mm的平底双碟，分别注入加热融化的培养基（表1）20ml，使在碟底内均勻摊布，放置水平台面上使凝固，作为底层。另取培养基适量加热融化后，放冷至 48-50℃(芽孢可至60℃），加入规定的试验菌悬液适量，摇匀，在每1双碟中分别加入5ml，使在底层上均匀摊布，作为菌层。放置在水平台上冷却后，在每1双碟中以等距离均匀安置不锈钢小管，用陶瓦圆盖覆盖备用。
检定法
二剂量法 取照上述方法制备的双碟不得少于4个，在每1双碟中对角的2个不锈钢小管中分别滴装髙浓度及低浓度的标准品溶液，其余2个小管中分别滴装相应的髙低两种浓度的供试品溶液；高、低浓度的剂距为2 : 1 或 4 : 1。在规定条件下培养后，测量各个抑菌圈直径（或面积），照生物检定统计法进行可靠性测验及效价计算。
三剂量法 取照上述方法制备的双碟不得少于6个，在每1双碟中间隔的3个本锈钢小管中分别滴装高浓度（S3）、中浓度(S2)及低浓度(S1)的标准品溶液，其余3个小管中分别滴装相应的高、中、低三种浓度的供试品溶液；髙、低浓度的剂距为1 : 0.8。在规定条件下培养后，测量各个抑菌圈直径（或面积），照生物检定统计法进行可靠性测验及效价计算。
表1 抗生素微生物检定试验设计表
① 两性霉素B双碟的制备，用菌层15ml代替两层。
②乙酰螺旋霉素，抗II检定培养基制备时，调节pH值使灭菌后为8.0-8.2。③ 含3%氯化钠。④ 加0.3 %葡萄糖。
第二法 浊度法
本法系利用抗生素在液体培养基中对试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后细菌池度值的大小，比较标准品与供试品对试验菌生长抑制的程度，以测定供试品效价的一种方法。
菌悬液制备
金黄色葡萄球菌悬液 取金黄色葡萄球菌的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35-37℃培养20-22小时。临用时，用灭菌水或0.9%灭菌氣化钠溶液将菌苔洗下，备用。
大肠埃希菌悬液 取大肠埃希菌的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在 35-37℃培养20-2 2h。临用时，用灭菌水将菌苔洗下，备用。
白色念珠菌悬液 取白色念珠菌的改良马丁琼腊斜面的新鲜培养物，接种于10ml培养基Ⅸ中，置 35-37℃培养8小时，再用培养基Ⅸ稀释至适宜浓度，备用。
标准品溶液的制备标准品的使用和保存，应照标准品说明书的规定。临用时照表3的规定进行稀释。标准品的品种、分子式及理论计算值见表2。供试品 溶液的制备精密称（或量）取供试品适量，照各品种项下规定进行供试品溶液的配制。
含试验菌液体培养基的制备 临用前，取规定的试验菌悬液适量，加人到各规定的液体培养基中，混合，使在试验条件下能得到满意的剂量-反应关系和适宜的测定浊度。已接种试验菌的液体培养基应立即使用。
检定法
标准曲线法 除另有规定外，取适宜的大小厚度均勻的已灭菌试管，在各品种项下规定的剂量-反应线性范围内，以线性浓度范围的中间值作为中间浓度，标准品溶液选择5个剂量，剂量间的比例应适宜，供试品根据估计效价或标示量溶液选择中间剂量，每一剂量不少于3个试管。在各试验管内精密加人含试验菌的液体培养基9.0ml，再分别精密加人各浓度的标准品或供试品溶液各1.0ml，立即混勻，按随机区组分配将各管在规定条件下培养至适宜测量的浊度值，在线测定或取出立即加人甲醛溶液0.5 ml以终止微生物生长，在530mn或580mn波长处测定各管的吸光度。同时另取2支试管各加人药品稀释剂1.0ml，再分别加入含试验菌的液体培养基9.0ml，其中一支试管与上述各管同法操作作为细菌生长情况的阳性对照，另一支试管立即加入甲醛溶液0.5m，混勻，作为吸光度测定的空白液。照标准曲线法进行可靠性检验和效价计箅D。
抗生素微生物检定法标准曲线法的计算及统计学检验
培养基的制备