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免疫组化实验结果出现高背景原因主要有：一抗浓度过高；二抗与抗原进行特异性结合；底物过量；没有封闭非特异性结合或封闭不充分；孵育温度过高；组织冲洗不彻底；存在内源性过氧化物酶活性；信号放大过度。
相应的解决办法有：提高一抗稀释倍数：不加一抗，直接加二抗进行验证，抗原和一抗尽量避免来源于同一种属：适当缩短孵育时间；延长封闭时间，改变封闭溶液，用10%血清封闭1小时或用1-5%BSA封闭30分钟：孵育温度为4℃；每个步骤都要用PBS反复冲洗；缩短信号放大时间，稀释信号放大试剂盒。