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免疫组化实验结果信号弱或无信号可能原因有:目的蛋白未表达;二抗选择错误;一抗稀释过大;染色前的固定破坏了抗原表位;细胞通透性差;表达目的蛋白的细胞过少。
解决措施有:实验过程中设置阳性对照,制备细胞裂解液,做WB实验证明目的蛋白在细胞中有表达;检查二抗适用种属是否与一抗种属来源一致;同一样品按最佳的二抗用量作一抗稀释曲线,以确定最佳的一抗稀释比例;石蜡切片固定液一般选取4%多聚甲醛或10%福尔马林,或10%PFA;增加通透剂作用时间或通透剂浓度,或改用其它通透剂;标本中使用更多的细胞,试用其他瞬时转染方法,或者使用稳定转染细胞系。