检测原理:采用单克隆Anti-HBS的两步夹心ELISA实验,微孔板上所包被及酶结合物所用分别为针对表面抗原不同位点的抗体。如果被检测血清中存在表面抗原,则可通过双抗体夹心的桥梁将辣根过氧化物酶链接到微孔板上,使TMB呈色。
实验步骤:
平衡:从冰箱中取出试剂盒的各组分,平衡至室温,微孔板开封后,余着及时以自封袋封存,
编号:取所需要数量微孔板固定于支架,编号。
稀释:用多道移液器往每个微孔中加入20ul样品稀释液。
加样:分别在相应孔中加入100ul待测样本血清、阳性对照血清或质控血清。
温育:置37℃恒温水浴锅中温育60分钟。
洗涤:用PBS-T缓冲液充分洗涤5次,洗涤后扣干,每次应保持30-60秒的浸泡时间(可在洗板机中进行)
加酶:在每一微孔中加入酶标记抗体50ul。
温育:置37摄氏度水浴锅中温育30分钟。
洗涤:用PBS-T缓冲液充分洗涤5次,洗涤后扣干,每次应保持30-60秒的浸泡时间。
显色:每孔加底物A,底物B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃暗置30分钟。
终止:每孔加入终止液50ul ,混匀。
测定:用酶标仪双波长法450nm/630nm测定每一微孔OD值,记录结果。
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