本法系依据蛋白质为含氮的有机化合物，当与硫酸和硫酸铜、硫酸钾一同加热消化时使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸液吸收后以硫酸滴定液滴定，根据酸的消耗量算出含氮量，再将含氮量乘以换算系数，即为蛋白质的含量。本法灵敏度较低，适用于0.2-2.0mg氮的测定。氮转化成蛋白质的换算系数因蛋白质中所含氨基酸的结构差异会稍有区别。
供试品溶液的制备 照各品种项下规定的方法制备，生物制品按如下方法操作。精密量取供试品（如供试品为冻干制剂或固体粉末时，应复溶后量取）适量，用0.9%氯化钠溶液定量稀释，制成每lml中含氮量约lmg的溶液，精密量取lml，作为总氮供试品溶液进行测定。
测定法
（1）本测定法适用于不含无机含氮物质及有机非蛋白质含氮物质的供试品。精密量取各品种项下规定的供试品溶液适量，置凯氏定氮瓶中，照氮测定法测定供试品溶液的含氮量。除另有规定外，氮转换为蛋白质的换算系数为6.25。
（2）本测定法适用于添加无机含氮物质及有机非蛋白质含氮物质的供试品。除另有规定外，精密量取各品种项下规定的总氮及非蛋白氮供试品溶液适量，分别置凯氏定氮瓶中，照氮测定法测定，以总氮量减去非蛋白氮量即为供试品溶液的含氮量。除另有规定外，氮转换为蛋白质的换算系数为6.25。
具体操作步骤
根据供试品的含氮量参考称取样品置消化管中，依次加人适量硫酸钾、硫酸铜和硫酸，把消化管放人消化仪中，按照仪器说明书的方法开始消解[通常为150℃，5分钟（去除水分）；350℃，5分钟（接近硫酸沸点400℃，60?80分钟]至溶液成澄明的绿色，再继续消化10分钟，取出，冷却。将配制好的碱液、吸收液和适宜的滴定液分别置自动蒸馏仪相应的瓶中，按照仪器说明书的要求将巳冷却的消化管装人正确位置，关上安全门，连接水源，设定好加入试剂的量、时间、清洗条件及其他仪器参数等，如为全自动定氮仪，即开始自动蒸馏和滴定。