一 、支原体培养
支原体常用培养基为PPLO，但血清（常用马血清或猪血清）和抗生素(醋酸跎)要自己添加。还有改良的Frey's培养基。在液体培养基中通常要加入酚红做指示剂的，当培养基由红色变为黄色时，即可判定支原体的生长程度。要强调一点，支原体的分离可能不太容易，那么要多盲传几代。液体培养基变黄后，在固体培养基上单克隆，以纯化分离的菌株。
在微生物实验室中把样本接种到灭菌后的培养基上，支原体的培养37℃即可，初次培养37℃，5％－10％CO2效果更好。其中，解脲支原体生长比较快，接种量104－ 105ccu，培养16－18h即可达到对数生长期。人型，肺炎，24－48h即可达到对数生长期。
（1） 肺炎支原体培养基
基础培养基 70ml
牛血清 （灭活） 20ml
25％的酵母浸液 10ml
50％葡萄糖 1－2ml 0.4
酚红 0.5ml
制霉素 0.001g
青霉素 10万IU
pH 7.8
（2）人型支原体培养基
基础培养基 70ml
马血清 20ml 25％的酵母浸液 10ml
30％L－精氨酸 0.33ml
0.4％酚红 0.5ml
制霉素 0.001g
青霉素 10万IU
pH 6.3
（3）解脲支原体培养基
基础培养基 70ml
马血清 20ml
25％的酵母浸液 10ml
30％尿素0.33ml
0.4％酚红 0.5ml
制霉素 0.001g
青霉素 10万IU
pH 6.0
二、支原体血清学检测
酶联免疫吸附法：采用间接ELISA技术检测被检测者支原体IgM或IgG抗体的方法。IgM抗体出现较早、一般在感染后1周出现，3-4周达高峰，以后逐渐降低，12-16周转阴。因此支原体IgM阳性可作为急性期感染的诊断指标。
补体结合法：人感染支原体后，支原体感染的抗原抗原糖脂成分刺激机体产生特异性抗体，与肺炎支原体细胞成分致敏的绵羊红细胞结合形成固着补体使之不发生溶血反应，反之则激活补体，与后加入指示系发生溶血反应。
三、凝集试验：明胶颗粒法是在特异性免疫凝集原理上，应用最新开发的明胶粒子和mp 纯化抗原。明胶粒子上没有抗原决定簇，无生物活性，对于血清成分的物理吸附作用也很小，非特异性反应大大较少。
四、PCR诊断技术
支原体含DNA和RNA两种核酸，其基因组为环状双链DNA。jensen是根据16rRNA基因的可变区p1蛋白基因的序列，设计出两对引物扩增上述两基因的一部分（583bp和153bp）。取患者样本处理后加入PCR仪、加入引物、模板及其它相关物质后进行核算扩增。
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