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结核病的细菌学检验

2016/6/25 11:52:54      来宝商城

一、抗酸杆菌涂片检查法

(一)直接涂片法

1、痰液 用折断的竹毛茬端挑取干酪样或脓性痰部分0.05-0.1ml,涂于载物玻片2/3处,均匀涂抹成2.0cm*2.5cm大小的卵圆形痰膜,待自然干燥,微火焰固定,染色镜检。载物玻片应清洁无划痕,一次性使用,每张玻片只涂一份标本。

2、脓液 同痰涂液法

3、病灶组织或干酪块等先用组织研磨器磨碎后再进行涂片。

4、尿液 留全量夜尿,静置4-5小时后,弃去上清,取沉淀部分尿液10ml,以3000r/min离心沉淀30分钟;取沉渣涂片。

5、胸、腹水标本 参照尿液涂片法

6、脑脊液 无菌操作收集脑脊液,放置冰箱或室温24小时,待薄膜形成后涂片。也可将脑脊液以3000r/min离心沉淀30分钟。弃上清,取沉淀物涂片。

(二)荧光染色涂片法 以白金耳或竹签挑选干酪样、脓性或有颗粒部分痰液,均匀涂布于载物玻片上使成适当厚度(痰液0.05ml)之涂片,待干后,于微火焰上固定,做荧光染色。

(三)集菌涂片 漂浮集菌法 取晨痰或12-24小时痰液经121℃灭菌15分钟,待冷后取5-10ml盛于体积为100ml的玻璃容器中,加灭菌蒸馏水20-30ml,加二甲苯0.3ml,放振荡器震荡10分钟取出。加蒸馏水至满瓶口,将已编号的载物玻片盖于瓶口静置20分钟,取下载玻片,自然干燥,火焰固定,染色镜检。

染色步骤:

1于火焰固定的涂片上滴加染色剂,加热至出现蒸汽(勿沸)3分钟,必要时可再续加染色剂,以免干涸。待冷,水洗。

2加脱色剂,脱至无红色为止,但不可超过10分钟、水洗。

3加复染剂经0.5分钟(集菌涂片法复染1-3分钟),水洗、待干、油浸镜检。

分支杆菌培养方法

(一)培养基 酸性罗氏培养基(分离培养用)。成分:谷氨酸钠(纯度95%以上)7.2g,KH2PO14g,MgSO47H2O 0.24g,枸缘酸镁0.6g,甘油12ml,蒸馏水600ml,马铃薯淀粉30g,新鲜鸡卵液1000ml,2%孔雀绿水溶液20ml。

制备方法:各盐类成分溶解后加马铃薯淀粉,混匀,沸水煮沸1小时呈糊状,待冷却后,加经消毒纱布过滤的新鲜鸡卵液,混匀,再加入2%孔雀绿水溶液,混匀,分装于经121℃高压灭菌的中型试管,每管加培养基7ml,斜置血清凝固器内1-2层为宜。90℃1.5小时或85℃1小时间歇两次。冷却后,37℃无菌试验24小时。培养基斜面颜色鲜艳,表面光滑无泡,有一定韧性和酸碱缓冲力,4℃保存,1个月内使用。

(二)前处理方法 碱处理法:痰液中加2%NaOH 2-4倍量,振荡器振荡5-10分钟或室温30分钟,其间振荡2-3次,使痰液化。

(三)接种方法 取前处理消化后痰液0.1ml,无菌接种于培养基斜面上,每份标本同时接种两支酸性改良罗氏培养基,放37℃孵育。


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