1.1 检测HBsAg
ELISA双抗体夹心法操作步骤：
a)配液：将3OmL浓缩洗涤液（20 X）用蒸馏水或去离子水稀释至600mL备用。
b)编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴、阳性对照各2孔和空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步相同）。
c)加样：分别在相应孔中加人待测样品或阴、阳性对照50ul。
d)温育：用封板膜封板后置37℃温育60mmn,
e)洗涤：吸去板内液体，用洗涤液注满各孔，静置1mm后吸干，重复洗涤5次，拍干。
f)加酶：每孔加人酶标试剂1滴（501L)，轻轻振荡混匀。
g)温育：用封板膜封板后置37C温育60mm,
h）洗涤：将孔内液体吸干，用洗涤液充分洗涤5次，拍干。
i)显色：每孔加人显色剂A.B液各1滴（50uL)，轻轻振荡混匀，37C避光显色15min,
j)测定：每孔加人终止液1滴（50uL)，轻轻振荡混匀，设定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长
450/630nm检测），用空白孔调零点后测定各孔OD值。
结果判断：
a)临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照孔OD均值X2.1（阴性对照孔OD值低于0.05
者按0.05计算）
b）阳性判定：样品OD值≥临界值（CUTOFF）者判阳性。
c)阴性判定：样品OD值＜临界值（CUTOFF）者判阴性。
1.2 检测抗-HBs
ELISA双抗原夹心法操作步骤：
a)配液：将3OmL浓缩洗涤液(20 X）用蒸馏水或去离子水稀释至600mL备用。
b)编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴、阳性对照各2孔和空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步相同）。
c)加样：分别在相应孔中加人待测样品或阴、阳性对照50ul.
d)温育：用封板膜封板后置37C温育60min,
e)洗涤：吸去板内液体，用洗涤液注满各孔，静置1min后吸干，重复洗涤5次，拍干。
f)加酶：每孔加人酶标试剂1滴（50uL)，轻轻振荡混匀。
g）温育：用封板膜封板后置37C温育60min,
h)洗涤：将孔内液体吸干，用洗涤液充分洗涤5次，拍干。
i)显色：每孔加人显色剂A、B液各1滴（50ul)，轻轻振荡混匀，37℃避光显色15min,
j)测定：每孔加人终止液1滴（50uL)，轻轻振荡混匀，设定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长450/630nm检测），用空白孔调零点后测定各孔OD值。
结果判断：
a)临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照孔OD均值X2.1（阴性对照孔OD值低于0.05
者按0.05计算）
b）阳性判定：样品OD值≥临界值（CUTOFF）者判阳性。
c)阴性判定：样品OD值＜临界值（CUTOFF）者判阴性。
1.3 检测HBeAg
ELISA双抗体夹心法操作步骤：
a)配液：将3OmL浓缩洗涤液（20X）用蒸馏水或去离子水稀释至600mL备用。
b）编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴、阳性对照各2孔和空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步相同）。
c)加样：分别在相应孔中加人待测样品或阴、阳性对照50ul
d)温育：用封板膜封板后置37℃温育60min
e)洗涤：吸去板内液体，用洗涤液注满各孔，静置1min后吸干，重复洗涤5次，拍干。
f)加酶：每孔加人酶标试剂1滴（501L)，轻轻振荡混匀。
g）温育：用封板膜封板后置37℃温育60min.
h)洗涤：将孔内液体吸干，用洗涤液充分洗涤5次，拍干。
i)显色：每孔加入显色剂A、B液各1滴（50ul)，轻轻振荡混匀，37C避光显色15min
j)测定：每孔加人终止液1滴（5如L)，轻轻振荡混匀，设定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长450/630nm检测），用空白孔调零点后测定各孔OD值。
结果判断：
a)临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照孔OD均值X2.1（阴性对照孔OD值低于0.05
者按0.05计算）
b)阳性判定：样品OD值≥临界值（CUTOFF）者判阳性。
c)阴性判定：样品OD值＜临界值（CUTOFF）者判阴性。
1.4 检测抗一HBe
ELISA竞争抑制法检测步骤：
a)配液：将3OmL浓缩洗涤液（20X）用蒸馏水或去离子水稀释至600mL备用。
b)编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴、阳性对照各2孔和空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步相同）。
c)加样：分别在相应孔中加人待测样品或阴、阳性对照50ul
d)加酶：每孔加人酶标试剂1滴（50ul)，轻轻振荡混匀。
e)温育：用封板膜封板后置37C温育60min
f)洗涤：将孔内液体吸干，用洗涤液注满各孔，静置1min后吸干，重复洗涤5次，拍干。
g）显色：每孔加人显色剂A、B液各1滴（50拌L)，轻轻振荡混匀，37C避光显色15min
h)测定：每孔加人终止液1滴（50拼L)，轻轻振荡混匀，设定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长450/630～检测），用空白孔调零点后测定各孔OD值。
结果判断：
a)临界值（CUTOFF)计算：临界值=阴性对照孔OD均值X0.50
b)阳性判定：样品OD值≤临界值（CUTOFF）者判阳性。
c)阴性判定：样品OD值＞临界值（CUTOFF）者判阴性。
A.1.5 检测抗一HBc
ELISA竟争抑制法检测步骤：
a)配液：将3OmL浓缩洗涤液（20X）用蒸馏水或去离子水稀释至600mL备用。
b)编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴、阳性对照各2孔和空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步相同）。
c)加样：分别在相应孔中加人待测样品或阴、阳性对照50ul
d)加酶：每孔加入酶标试剂1滴（5Oul)，轻轻振荡混匀。
e)温育：用封板膜封板后置37℃温育60min
f)洗涤：将孔内液体吸干，用洗涤液注满各孔，静置1mm后吸干，重复洗涤5次，拍干。
g）显色：每孔加人显色剂A、B液各1滴（50ul)，轻轻振荡混匀，37C避光显色15min,
h)测定：每孔加入终止液1滴（5OuL)，轻轻振荡混匀，设定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长450nm/630nm检测），用空白孔调零点后测定各孔OD值。
结果判断：
a)临界值（CUTOFF)计算：临界值=阴性对照孔OD均值X0.50
b)阳性判定：样品OD值≤临界值（CUTOFF）者判阳性。
c)阴性判定：样品OD值＞临界值（CUTOFF）者判阴性。
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