人细小病毒B19属于细小病毒科红病毒属,是20nm-26nm的二十面体无包膜病毒,一般通过呼吸道进行传播,也可经输血、血液制品及血-胎途径垂直传播。目前针对细小病毒B19的检测方法主要有血清学检测和PCR检测,分别针对血清中存在抗体和病原核酸进行检测。
目前针对细小病毒19检测方法主要有血清学检测和PCR检测,分别针对血清中存在抗体和病原核酸进行检测。B19的PCR检测方法主要包括:普通PCR,巢氏PCR和荧光定量PCR等,荧光定量PCR检测方法由于其灵敏度高,特异性好、定量准确,并且具有实时检测和高通量的优势,是B19核酸检测的重要工具。
免疫电镜:死胎或尸体脏器标本经HPVB19单克隆抗体处理。负染后,在电镜下观察结晶状排列的病毒颗粒。
酶联免疫吸附实验:
ELISA捕捉法检测IgM抗体 将HPVB19基因重组抗原包被在固相载体表面,加入被检血清标本,再加入辣根过氧化物酶标记的抗人μ链,用酶标仪检测。人体感染 病毒后,第2周出现IgM抗体,能在体内维持2~3个月[25-28]。用于疾病早期诊断。
ELISA检测IgG抗体:将基因重组抗原包被在固相载体表面,加入被检血清标本,再加入辣根过氧化物酶标记的抗人γ链,用酶标仪检测。人体感染病毒后,第2周末和第3周初出现IgG抗体,能在体内维持很长时间。用于流行病学调查研究。 ELISA检测IgA抗体:临床症状出现后,短期内能在血清中检测到IgA抗体。
固相放射免疫试验
检测血清标本中IgM、IgG和IgA抗体将基因重组抗原包被在固相载体表面,加入被检血清标本,再加入125I标记的抗人μ链、γ链或α链,用γ计数器检测。
免疫荧光技术
让感染病毒的细胞长在盖玻片上或尸体脏器切片,用HPVB19单克隆抗体与之结合,再加入异硫氰酸荧光素标记的抗鼠IgG,在荧光显微镜下观察黄绿色荧光。免疫荧光技术用于疾病发病机制研究。
核酸扩增技术
是检测HPVB19DNA技术的总称。用于献血员筛选,敏感性和特异性都很高。用血清学免疫学技术检测献血员,不能检测出处于“窗口期”的病毒携带者,造成漏检。核酸扩增技术明显提高了血源安全性
Southern斑点杂交技术
用限制性内切酶处理待检标本DNA,通过琼脂糖凝胶电泳,进行分离,并使其变性,然后转移到硝基纤维膜上。固定后,与同位素或相关标志物标记的DNA探针进行检测。如在待检物中含有与探针互补的基因序列,两者通过碱基互补,用自显影或相应技术进行检测
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