一、标本的收集
患者粪便、呕吐物、肛拭子为必取标本。水样便或呕吐物采样量一般为1ml-3ml,成形粪便采取指甲大小的粪便量；肛拭子可用直肠棉拭子或采便管由肛门插入直肠内3-5cm处旋转后取出，置增菌液或运送培养送检。
二、标本的送检
采得的标本应立即接种于培养基。不能立即接种的，应放入pH8.8-9.0的碱性蛋白胨或文腊二氏保存液或插入Cary-Blair半固体保存培养基中送检。标本与保存液的比例为1:5。
三、分离培养
增菌后分离培养：所有标本均应接种碱性蛋白胨水培养基置37℃增菌6h-8h后，从菌膜下层取一接种环培养物，划线接种于强弱选择性培养基各一个置37℃培养18-24h。必要时进行二次增菌培养。
直接分离培养：对急性期患者水样便标本在进行增菌培养的同时可取一接种环或用肛拭子直接接种在选择性培养基上置37℃培养18-24h。
常用强选择性培养基包括庆大霉素琼脂、TCBS琼脂和四号琼脂等。弱选择性培养基一般使用碱性营养琼脂等。
不同分离培养基上生长的霍乱弧菌典型菌落特征不同，常见分离培养基的37℃ 18h-24h培养物的菌落特征如下：
碱性营养琼脂：霍乱弧菌在碱性营养琼脂上生长的菌落呈现为无色，圆形，透明或半透明、表面光滑湿润、扁平或稍凸起、边缘整齐、菌落直径一般约2mm。
庆大霉素琼脂和四号琼脂：菌落特征与碱性营养琼脂上生长的菌落相似，但透明性略差，多呈半透明状，由于这类培养基均含有亚碲酸盐成分，菌落中央常呈灰色或灰黑色，并随培养时间的延长而加深。
TCBS琼脂：菌落生长呈黄色发亮、表面光滑、润湿、稍凸起、边缘整齐。
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