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淋病实验室诊断

2016/9/28 17:40:10      来宝商城

    淋球菌感染的实验室诊断技术主要有:涂片染色直接显微镜检查,观察淋球菌的形态特征;分离培养淋球菌;直接检测临床标本中淋球菌成分如抗原或DNA。

1、直接显微镜检查:最常用的方法是分泌物涂片做革兰染色,在光学显微镜下观察淋球菌细胞形态。

    涂片固定:取材后将拭子在玻片上稍用力滚动一下,制成薄而均匀的涂片,自然干燥后将涂片(涂膜向上)迅速通过火焰2-3次,加热固定。应避免加热过度使形态扭曲。

    革兰染色:1、将结晶紫溶液铺满在涂片的涂膜面上,染色1min,流水轻轻冲洗。2、将碘液铺满涂膜面上,染色1min,流水轻轻冲洗。3、用乙醇或丙酮脱色,至涂膜无蓝色脱下为止。一般需10s-20s(时间长短取决于涂片的厚薄,应避免过度脱色),流水轻轻冲洗。4、用碱性复红或沙黄染液复染1min,流水冲洗后用吸水纸轻轻吸干。

结果观察:在光学显微镜(1000×油镜下)下检查涂片。检查时注意观察细胞类型(如上皮细胞、中性粒细胞),病原体的染色特性(革兰阳性或阴性)、形状(球状或杆状)及位置(细胞内或细胞外)等。淋球菌为革兰阴性菌,常成对排列,菌体呈肾形,两菌长轴平行,接触平坦或稍凹,位于中性粒细胞内。

2、淋球菌分离培养

培养基:分离淋球菌一般选用营养丰富的选择性培养基。常用的选择性培养基有ThayerMartin(T-M)培养基、含抗生素的血液琼脂或巧克力琼脂培养基。可购买商品化的培养基或实验室自配,培养基应密封在塑料袋中,于4℃冰箱存储,存储时间不应超过三周,时间过久则分离率降低。

接种标本:取材后标本应尽可能及早接种。培养基应先置于温室中预温。将取材的拭子转动涂布于平皿上的1/4范围,然后用接种环分区划线,以保证获得较纯的单个菌落。

培养条件:接种标本后,立即将平皿置于36℃、含5%-10%二氧化碳,湿润(70%湿度)的环境中培养。淋球菌为需氧菌,但初代分离需要二氧化碳。二氧化碳环境可由二氧化碳培养箱、二氧化碳产气袋或烛缸提供。使用烛缸时应使用白色,无芳香味的无毒蜡烛。在缸底部放些浸水棉球以保持一定的湿度。

观察结果:培养24h后检查平皿,此时没有菌生长的平皿继续培养至48h,仍无菌生长才可丢弃,做出淋球菌培养阴性的报告。对选择性培养基上分离出的可疑菌落做进一步鉴定。

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