制备重组乙型肝炎疫苗的方法大致有三种，常用的宿主细胞有1、酿酒酵母，是由重组酿酒酵母表达的乙型肝炎病毒表面抗原经纯化，加入铝佐剂制成 2、CHO细胞，由重组CHO细胞表达的乙型肝炎病毒表面抗原经纯化，加入氢氧化铝佐剂制成 3、汉逊酵母，由重组汉逊酵母表达的乙型肝炎病毒表面抗原经纯化，加入铝佐剂制成。
【制法】取国家批准的重组酵母乙型肝炎疫苗的原始菌种，经一代扩增，制成生产菌种，逐级扩增后接种于发酵罐，在适宜温度和时间内进行三级发酵，收集细胞，经破碎，吸附粗提，疏水色谱法精提乙型肝炎表面抗原，再经硫氰酸盐处理，除菌滤过，甲醛灭活，氢氧化铝吸附等，加入硫柳汞作为防腐剂。
取国家批准的重组CHO乙型肝炎疫苗的细胞株，用静置培养或旋转法培养细胞，当乙型肝炎表面抗原的分泌量达到每1.0mg/L时，收获培养液，经硫酸铵盐析，2～3次密度梯度离心和色谱法纯化后，再经浓缩，除菌滤过，甲醛灭活，氢氧化铝吸附等，加硫柳汞作为防腐剂，分装制成。
【鉴定】
1、无菌检查 按通则检查，必须无菌存在
2、蛋白质含量 采用福林酚法，样品处理后用紫外可见分光光度计检测吸光度。
3、特异蛋白带 采用还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶浓度为15%。上样量为1.0μg，银染法染色，应有分子质量为20-25kD蛋白带，可有ＨＢｓＡｇ多聚体蛋白带。
4、Ｎ端氨基酸序列测定 用氨基酸序列分析仪测定，每年至少一次。
5、纯度 采用免疫印迹法测定，或是高效液相色谱法。
6、细菌内毒素检查 凝胶限度试验
7、宿主细胞ＤＮＡ残留量 根据样品性质可选用ＤＮＡ探针杂交法， 或者是荧光染色法。
8、吸附完全性 将供试品６５００ｇ离心５ｍｉｎ取上清液，依法测定 酶联免疫法
9、化学检定
９．１硫氰酸盐含量 供试品６５００ｇ离心５ｍｉｎ，取上清液， 用紫外可见分光度法进行检测。
９．２Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００含量 供试品于６５００ｇ离心５ｍｉｎ，取上清液，简单处理后在波长３４０ｎｍ下检测浓度。
９．３ＰＨ值在５．５－７．２之间
９．４游离甲醛含量
９．５铝含量
９．６渗透压摩尔浓度
９．７鉴别实验 酶联免疫法
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