1、加0.1ml抗人IgM u 链抗体于塑料微孔板，37℃过夜。
2、倒掉液体，不洗，用10%牛血清的0.05%吐温(Tween-20)生理盐水0.2ml，封闭每孔，放于37℃。
3、1h后倒去上述牛血清封闭液加1:100稀释液的待测患者血清（或1:2稀释的待测患者脑脊液），37℃作用1.5-2h。
4、倒出待测血清（或脑脊液），用0.05%吐温生理盐水液洗3次，然后分别于上孔内分别加已知∣型、‖型和Ⅲ型的脊髓灰质炎抗原、每型加2孔，每孔加0.1ml，置4℃过夜。
5、吸出抗原、洗3次后，各相应孔加已知对应的抗血清（即加∣型病毒抗原孔加∣型抗血清，‖型抗原孔加‖型抗血清。。。）0.1ml。
6、37℃1h-1.5h后倒去抗体，洗3次后各加酶标抗抗体0.1ml。
7、37℃结合1h-1.5h后倒出酶标抗体，用洗液洗三次，加邻苯二胺底物，每孔0.1ml。
8、避光作用5min-15min。
9、待加正常细胞为对照抗原的孔，即将显色之时各孔立即加0.05ml 2mol/l硫酸终止反应。
在490mm光源下测定OD值。
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