全部产品分类
当前位置： 首页 > 产品阐释 > 分子杂交的应用
核酸分子杂交技术是利用 DNA 变性与复性的原理，在某种理化因素作用下 DNA 双链分子解链变性后，在 DNA 复性重新形成双螺旋结构时，把不同的DNA 单链分子或者 DNA 与 RNA 的混合物放在同一溶液中，只要在 DNA 或 RNA 单链分子之间存在一定的碱基互补配对关系，就可以在 DNA 之间或 DNA 与RNA 之间形成化的双链。蛋白质分子杂交是一种借助特异性抗体鉴定抗原的有效方法。 分子杂交技术有很多种，下面重点介绍一种常用的分子杂交技术的基本流程和应用。 Southern 杂交——DNA 和 DNA 分子之间的杂交1．1 基本流程第一步，从组织或细胞中提取出 DNA，经过适当的限制酶切后进行琼脂糖凝胶电泳，将不同大小的片段分开；第二步，将凝胶上的 DNA 片段转移到硝酸纤维素膜上；第三步，用标记了放射性同位素（或生物素）的目的基因的 DNA 片段作为探针与硝酸纤维素膜上的DNA 进行杂交；第四步，将 X 光底片压在硝酸纤维素膜上，在暗处使底片感光；第五步，将 X 光底片冲洗，如果在底片上出现黑色条带，则表明待测样品中含有目的基因。1．2 具体应用Southern 杂交主要用来研究 DNA 分子中某一基因位置、 某一专一序列在待检样品中存在与否及两种核酸分子之间的相似性。具体来说，此项分子杂交的应用有以下几点。1．2．1 用于对基因组中特定基因的定位及检测
如基因工程中用于检测目的基因是否整合到受体生物的染色体 DNA 中。这是目的基因能否在真核生物中稳定遗传的关键。1．2．2 用于从基因文库中找到所需要的基因 将含有某种生物不同基因的许多 DNA 片段，导入受体菌的群体中储存，构建了该种生物的基因文库，但如何从基因文库中找到所需要的基因呢？具体做法如下。第一步，通过 PCR 方法将目的基因已知的部分核苷酸序列扩增出来，制成探针。第二步，将基因文库中的所有菌落转移到硝酸纤维素膜上，然后通过处理，溶解消化掉细菌中的蛋白质，并使 DNA 固定在膜上。第三步，按 Southern 杂交的方法进行杂交。第四步，在 X 光底片上出现黑斑的菌落含有所需要的目的基因（若选用别的标记方法，有阳性信号的菌落则含有所需要的目的基因）。第五步，从该菌落中再提取目的基因。1．2．3 用于基因诊断遗传病、 癌症等举两个常见的病例：镰刀型细胞贫血症是 β—珠蛋白基因第六个密码子发生单个碱基突变（ A—T），这一突变使该基因内部一个 MstⅡ限制酶位点丢失。因此，将正常人和带有突变基因个体的基因组 DNA 用 MstⅡ切割后，与 β—珠蛋白基因探针杂交，即可将正常人、 突变基因携带者及镰刀型细胞症患者区别开来。苯丙酮尿症（ PKU）是新生儿中发病率较高的一种遗传病，如果用限制性内切酶 EcoRV 酶解苯丙酮尿症患儿及其父母的 DNA，再与苯丙氨酸羟化酶基因探针杂交，分析杂交片段后就会发现其父母都具有 30 kb/25 kb 酶特异片段，患儿则具有 30 kb/30 kb片段。这说明患儿的 2 条 30 kb 片段都与致病基因连锁，分别从父母亲处遗传而来，而父母亲另一条染色体的 25 kb 不与致病基因连锁。在此基础上，分析另一未知胎儿，如果杂交图谱显示 30 kb/25 kb 特异片段，就可诊断胎儿为杂合子，如果杂交图谱显示为30 kb/30 kb 片段，即为患儿。