一、间接红细胞凝集试验
抗原：为用葡聚糖凝胶G100初步纯化SEA致敏的绵羊红细胞。所用绵羊红细胞先经2.5%戊二醛醛化及1:5000鞣酸溶液鞣化后再行致敏。致敏后的红细胞以含10%蔗糖及1%正常兔血清的pH7.2PBS配5%悬液，分装安瓿低压冻干封存。每批致敏红细胞做效价测定，滴定达1:1280-1：2560为合格。抗原也可采用SEA和AUA的混合抗原；血球也可采用人“O”型红细胞。
操作方法
1 启开安瓿，每支以1ml蒸馏水稀释混匀备用。
2 用微量滴管滴加4滴生理盐水于微量血凝反应板第一排第二排孔内，第三孔空白，第四孔加一滴。
3 第一孔内储存待检血清，并从中吸取血清1滴加入第二孔内，充分混匀后，吸出两滴于第三、第四孔各加一滴。在第四孔混匀后弃去1滴是第三。第四孔血清稀释度为1:5,1:10。
4 用定量吸管吸取致敏红细胞悬液，于第三孔和第四孔各加1滴，立即旋转震摇2min，室温下静置1h左右，观察结果。
5 每次试验均应有阳性血清做阳性对照，生理盐水做阴性对照。
结果判断
阴性反应为红细胞全部沉入孔底，肉眼见一边缘光滑，致密的小圆点。
阳性反应;++++ 红细胞形成薄层凝集，边缘呈现不规则皱褶
+++红细胞形成薄层凝集，充满整个孔底
++红细胞形成薄层凝集，面积较“+++”者小
+红细胞大部分沉集于孔底，形成一圆点，周围有少量凝集的红细胞，肉眼见周边模糊（或中间为明显的空白点）
反应标准：以血清1:10稀释出现凝集反应可判为阳性。。
二、酶联免疫吸附试验
抗原或抗体：常用SEA包被载体检测抗体，亦可用单克隆抗体包被载体以检测抗原
操作方法
1 于微量聚苯乙烯或聚氯乙烯塑料板的凹孔中加入100ul以pH9.6碳酸盐缓冲液稀释的SEA或单克隆抗体，置4℃过夜。
2 次日倾去抗原，用含有0.05%吐温的-20的磷酸缓冲盐水（PBS-T pH7.4,0.01mol/L）洗涤三次，每次5min。
3 于凹孔中加入以PBS-T作1:100或1:200稀释的受检者血清及参考血清（每批设1个阴性对照和1个阳性对照）100ul,37℃，1h。
4 倾去血清，以PBS-T洗涤三次，每次5min
5 加入以PBS-T做1:1000-1:4000稀释的辣根过氧化物酶（HRP）-标记结合物100ul,37℃，1h。
6 倾去酶标记结合物，以PBS-T洗涤3次，每次5min。
7 加入100ul已加入H2O2的邻苯二胺（OPD）或四甲基联苯胺（TMB）底物溶液，37℃，30min。
8 在各凹孔中加入2mol/L硫酸以终止反应。
9 在酶标专用比色计上读取492nm（OPD为底物）或450nm（TMB为底物）光密度（OD）值，以P/N≥2.1倍为阳性。
标签：
阅读量：508