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造血干细胞采用阶梯降温法与程序降温法保存的比较

2014/8/10 20:53:25      来宝商城

 外周血造血干细胞采用超低温冰箱转液氮阶梯降温法与传统程序降温法保存造血反细胞的比较

 

摘要

背景:在造血干细胞整个冷冻保存过程中,受到降温速度、储存温度深浅、冷冻保护剂组合等因素影响,各国学者在提倡选择何种保存方法上面存在不同的主张。

目的:比较-80摄氏度低温冰箱转液氮阶梯降温法与传统程序降温法保存外周造血干细胞的效果。

方法:将采集的造血干细胞分两组,第一组细胞浓度为,加入10%二甲基亚砜,放入程序冷冻仪内程序设置为室温至-4摄氏度按照1摄氏度/min的速度降温,按照35℃/min快速降至-45摄氏度,再以15℃/min升至-21℃,然后以5℃/min降至-90℃,取出冷冻管置-196℃液氮罐内。第二组细胞浓度为,加入5%二甲基亚砜、3%羟乙基淀粉、4%人血白蛋白,将冷冻管置-80℃冰箱过夜后取出,置-196℃液氮罐内的气相,在过夜后置液氮罐液相内。

结果与结论:两组冷冻方法保存细胞的锥虫蓝居然率、回收率、凋亡率和死亡率差异无显著性意义(P>0.05)。结果显示用5%二甲基亚砜、4%白蛋白-3%羟乙基淀粉组成的冷冻保护剂,通过-80℃低温冰箱转液氮阶梯降温法冷冻保存造血干细胞与传统10%二甲基亚砜作为冷冻保护剂用程序降温的方法取得一样效果,操作简便易于临床应用。

关键词:冷冻保护剂、程序降温、造血干细胞、非程序降温、二甲基亚砜

 

引言

冷冻技术一直都是造血干细胞移植至关重要的技术之一。目前造血干细胞的低温冷冻保存采用两大方法:程序降温-196℃液氮保存和非程序降温-80℃低温冰箱保存,两种方法各有优缺点,程序降温法保存期长,但程序降温法实验过程费时,需要购买设备多,非程序降温-80℃低温冰箱保存法操作简单,但保存期短,且受停电及冰箱工作状态等影响。

实验探寻一种能二者兼顾而又不降低细胞存活率的冻保存方法。

材料和方法

设计:低温保存方法优化革新后的效果比较

材料

样本来源:行自体外周血造血干细胞移植患者,采用大剂量阿糖胞苷、大剂量环磷酰胺或足叶乙苷,阿糖胞苷方案化疗联合粒细胞集落刺激因子进行动员,在第4或第5天用Cobe Spectra血细胞分离机采集外周血造血干细胞。

 

主要仪器、试剂:

血细胞计数仪

流式细胞仪

血细胞分离机

程序冷冻仪

-80℃低温冰箱

羟乙基淀粉

人血白蛋白

 

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