分光光度计的原理介绍
分光光度计使用的是分光光度计法。分光光度计是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内的吸光度活发光强度,对该物质进行定性和定量分析的方法。其依据是Lambert-Beer定律:
单色光辐射穿过被测物质溶液时,在一定的浓度范围内被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度(光路长度)成正比,其关系如下式:
A = lg 1 / T=ΕC L
A —— 检测物质的吸光度;
T —— 透光率;
Ε—— 吸光系数,其物理意义是当溶液浓度为1%(g / ml), 液层厚度为1cm时的吸光度数值
C —— 检测溶液的浓度,为100ml溶液中所含被测物质的重量(按干燥品或无水物计算),g;
L —— 液层的厚度,cm;
物质对光的选择性吸收波长,以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后,可用同样条件将该供试品配成溶液,测定其吸光度,即可由上式计算处供试品中该物质的含量。在可见光区,除某些物质对光有吸收外,很多物质本身并没有吸收,但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。