DNA扩增步骤

2016/6/13 14:04:14 来宝商城

一、试剂准备

1、DNA模板

2、对应目的基因的特定引物

3、10*PCR Buffer

4、2mM dNTPmix：含dATP dCTP dGTP dTTP各2mM

5Taq酶

二、操作步骤

1、在冰浴中，按以下次序将各成分移入（移液器）一无菌0.5ml离心管中

10*PCR buffer 5ul

dNTP mix(2mM) 4ul

引物1（10pM） 2ul

引物2（10pM） 2ul

Taq酶（2U/ul） 1ul

DNA模板（50ng-1ug/ul） 1ul

加ddH₂0至 50ul

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油

2、调节好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，进行扩增。一般: 在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃40s-58℃ 30s-72℃ 60s，循环30-35次，最后72℃保温7min。

3、反应结束，PCR产物置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

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