配合饲料、浓缩饲料和单一饲料等粗蛋白质测定，实验方法为凯氏法。
一、实验原理：
凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸钱。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白质含量。
二、实验仪器设备：
2.1 分析天平:感量0.1 mg。
2.2 实验室用样品粉碎机。
2.3 分样筛:孔径 0. 45 m m (40 目)。
2.4 消煮炉。
2.5 凯氏定氮仪。
2.6 滴定管:酸式，10 mL、25 mL 。
2.7 锥形瓶:150 mL ,250 mL 。
2.8 容量瓶:100 m L 。
2.9 消煮管:250 m L .
2.10 凯氏蒸馏装置:常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式。
三、操作步骤：
步骤 | 操作 | 试剂 |
试样的消煮 | 称取0.5 ~ 1g试样准确至0.0002 g,放入消化管中，加2片消化片( 仪器自备)或6.4 g 混合催化剂,12 ml 硫酸，于420 ℃下在消煮炉上消化1h。取出放凉后加入30 ml蒸馏水。 | 1.混合催化剂：0.4 g 硫酸铜，5个结晶水,6 g 硫酸钾 ,均为化学纯，磨碎混匀。 2.硫酸:化学纯，含量为98%，无氮。 |
氨的蒸馏 | 1.采用全自动定氮仪时，按仪器本身常量程序进行测定。 2.采用半自动定氮仪时，将带消化液的管子插在蒸馏装置上，以25 mL硼酸为吸收液，加入2滴混合指示剂 ,蒸馏装置的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消煮管中加入50 mL 氢氧化钠溶液进行蒸馏。 蒸馏时间以吸收液体积达到 100 mL 时为宜。降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。 | 1.硼酸溶液：2%硼酸水溶液。 2.混合指示剂:甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合。3.氢氧化钠溶液:40%氢氧化钠水溶液。 |
滴定 | 用0.1 mol/L 的标准盐酸溶液滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。 | 0.1 mol/L盐酸(HCl)标准溶液:8.3 mL盐酸，分析纯，注入1000mL 蒸馏水中。 |
空白测定 | 称取蔗糖0.5 g，代替试样，按以上三步进行空白测定，消耗 0.1 mol/L 盐酸标准溶液的体积不得超过0.2 mL , 消耗0.02 mol/L 盐酸标准溶液体积不得超过0.3 m L o | 0.02 m ol/L 盐酸(HCl)标准溶液:1.67 mL盐酸，分析纯，注入1 000 mL蒸馏水中。 |
计算 |  | V2：滴定试样时所需标准酸溶液体积,mL； V1：滴定空白时所需标准酸溶液体积,m L； C ：盐酸标准溶液浓度，mol/L ； m：试样质量：g ； V：试样分解液总体积，mL； V':试样分解液蒸馏用体积，mL ； 0.0140 ：每毫克当量氮的克数； 6.25：氮换算成蛋白质的平均系数。 |
凯氏定氮仪：
