Western Blot是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳将蛋白根据分子量大小分开，然后转移到固相载体（杂交膜）上，最后通过抗原抗体反应检测杂交膜上的靶蛋白是否存在，从而检测到靶蛋白在待测标本中的表达情况。目前Western Blot已经是蛋白检测的最常用和成熟的技术之一。
要成功完成Western Blot检测，必须满足4个条件：
1. 凝胶洗脱：转移期间蛋白质必须从凝胶中洗脱出来，如果蛋白质还截留在凝胶中，将无法在膜上进行分析。
2. 吸附到膜上：在转移过程中蛋白质必须吸附到膜上，如果蛋白不吸附，将无法在膜上进行分析。
3. 处理期间仍截留在膜上：在转移后的处理过程中蛋白质必须保持吸附在印迹膜上。
4. 处理过程中可接近：被吸附的蛋白质必须能够与检测试剂接触，如果蛋白质被掩盖则无法检测。
成功进行Western Blot检测，设置合适正确的对照是必不可少的，只要正确设置了这些对照，即可快速和准确的找到Western Blot的问题所在，并保证实验结果的准确性和特异性！一般需要设置的对照如下：
阳性对照：明确表达检测蛋白的组织或细胞，用于检测抗体的工作效率
阴性对照：明确不表达检测蛋白组织或细胞，用于检测抗体的特异性
二抗对照：不加一抗，用于检测二抗的特异性
内参对照：检测标本的质量和二抗系统
空白对照：不加一抗和二抗；用于检测膜的性质和封闭的效果
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