抗人T细胞免疫球蛋白是由人T淋巴细胞免疫家兔后,取其血清或血浆经去除杂抗体、纯化、浓缩后,再经病毒灭活处理并加入适量的稳定剂冻干制成。抗人T细胞免疫球蛋白的效价检测对其质量控制具有很重要的作用。
一、检测方法:淋巴细胞毒试验
二、检测原理:本法是依据抗人T细胞免疫球蛋白与人淋巴细胞E受体结合后,可阻止绵羊红细胞与淋巴细胞E受体特异性结合,根据其结合抑制率测定供试品抗人T淋巴细胞免疫球蛋白效价
三、试剂:淋巴细胞分离液、Hank's液、20%胎牛血清Hank's液、淋巴细胞悬液、补体(采取正常家兔血清)、0.5%台盼蓝生理氯化钠溶液、2.5%戊二醛溶液
四:供试品溶液的制备、阳性对照溶液的制备、阴性对照溶液制备
五、实验步骤:1、取 供 试 品 溶 液 0.05ml,加 淋 巴 细 胞 悬 液0.0 5 m l , 置 37°C、1 小 时 2、加 1 : 5 稀 释 的 家 兔 血 清0.05ml,置 37°C、3 0 分 钟 3、 加 0.5% 台盼蓝生理氯化钠
溶 液 0.05ml,置 37°C、5 分 钟 ,立即 镜检 计数 淋 巴 细 胞 ,计算死亡细胞率,一 般 数 100个淋巴细胞。4、取阳性对照溶液 0.05ml,加 淋 巴 细 胞 悬 液 0.05ml, 自 “ 置 37°C、1 小时”起 , 同 法 操 作 ,作 阳 性 对 照 。6、取 阴 性 对 照 溶 液0.05ml,加 淋 巴 细 胞 悬 液 0. 05ml, 自 “ 置 37°C、1 小 时 ”起 ,同法操作,作阴性对照
六、设备使用
产品名称 | 产品的作用 |
超净工作台 | 为效价检测提供无菌无尘的环境 |
高压蒸汽灭菌器
| 用于检测器具、试剂、稀释剂的灭菌 |
低温冰箱
| 用于淋巴细胞分离液制备过程中冷丙酮的存放 |
离心机 | 利用离心力,分离各组分 |
恒温水浴锅 | 试验中进行恒温加热
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血球计数板 | 计算淋巴细胞数量 |
显微镜
| 镜检时观察微生物的数量 |
纯水机和超纯水机 | 用于效价检测试剂的稀释配制
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