蜂蜜中羟甲基糠醛（HMF）含量多少是决定蜂蜜质量的重要标志。研究发现，蜂蜜中的羟甲基糠醛（HMF）由于不恰当的热处理和长时间的储藏可以自然地产生。蜂蜜中羟甲基糠醛（HMF）浓度的增加反映了蜂蜜的新鲜程度、是否掺假及热加工处理条件优劣。
GB/T 18932.18-2003中规定了液相色谱—紫外检测法测定蜂蜜中的羟甲基糠醛，实验原理为：蜂蜜样品中的羟甲基糠醛经HPLC反相色谱柱分离，用液相色谱仪紫外检测器检测。用标准曲线外标法定量。
二、实验仪器设备（由来宝商城提供）
1、高效液相色谱仪:配有紫外检测器。
2、分析天平:感量0.01g。
3、注射器:10 mL。
4、过滤膜：0.45um。
三、实验操作流程
1、试样处理
称取10 g混合均匀试样，精确至0.01g，置于100 mL烧杯中，加人10 mL甲醇，用玻璃棒轻轻搅拌均匀，使试样完全溶解。 转移至 lO0 mL 容量瓶中，用水释稀至刻度，充分混匀。 用0.45 um 的滤膜过滤，滤液用于液相色谱仪紫外检测器测定。
2、色谱测定
（1）液相色谱条件
a) 色谱柱:Diamonsl C18 5um , 250 mm X 4.6mm（i.d）或相当者；
b) 流动相:甲醇+ 水(10十90) ；
c) 流速:1.0 mL/m in ；
d) 检测波长:285 nm ；
e) 柱温:300C；
f) 进样量:10 uL。
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（2）液相色谱测定
首先测定羟甲基糠醛标准工作溶液在上述色谱条件下的峰面积，以峰面积对相应浓度绘制标准工作曲线，然后测定未知样品，用标准工作曲线对样品进行定量。 样品溶液中经甲基糠醛的响应值应在仪器的线性范围内。 在上述色谱条件下，羟甲基糠醛的参考保留时间约为 12 min。
（3） 平行试验
按上述步骤，对同一试样进行平行试验测定。
（4）空白试验
按上述步骤，对 10% 的甲醇溶液进行测定。
（5）添加试验
每批样品应至少进行一个样品的添加试验。 称取10 g试样，精确0. Olg，添加1.OmL 羟甲基糠醛标准储备溶液（0.20 mg/mL），加9.9 mL 甲醇溶解，其他步骤按试样处理步骤进行。
3、结果测定
结果按式(1) 计算:
式 中 :
X — 试样中羚甲基糠醛含量，单位为毫克每千克(mg/kg) ;
c— 从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每毫升(ug/m L) ;
V — 定容体积，单位为毫升(mL) ;
m — 样液所代表试样的质量，单位为克(g)。
