病毒分离
1、在50ml耐氯仿的塑料（带盖）离心管上标记本号。
2、在每管中加入10ml的pH7.2-7.4的PBS缓冲液，1g直径约为3mm的玻璃和1ml的氯仿。
3、在生物安全柜中将粪便标本中的半量加入到标记好的离心管中(确保离心管上的标号与原始标本的标号一致）。拧紧盖后用力振荡20min，制成20%粪便悬液。
4、3000r/min，在冷冻离心机中离心20min，在生物安全柜中吸出不含氯仿的上清液，分别装入2个有外螺旋盖的冻存箱中，1管存于4℃-8℃以备3接种细胞，另1管在-20℃条件下保存备用。
5、将标本悬液同时接种到生长良好并刚长成片的RD细胞和L20B细胞上，每种细胞至少接种2管，每管接种0.2ml，粪便标本悬液，正确标记每支试管（包括标本编号、日期、传代数等）；对每一种细胞标记1管作为阴性对照。
6、试管放在36℃发孵育箱中倾斜5度静置培养。
7、使用标准或倒置显微镜每天观察细胞培养管，记录接种管和对照管细胞所发生的变化至少1周，记录CPE（1+-4+）提示细胞受毒性反应、老化或污染的影响而发生的变化（1+，＜25%；2+，25%-50%；3+，50%-75%；4+，75%-100%）
8、如果有特征性的肠道病毒CPE出现，例如细胞变圆，折光增强并脱离管壁，应记录下来，并观察直到75%的细胞发生变化（3+CPE），然后保存在-20℃以备二次换代。同一病例的二次传代的病毒分离物可以放在一起用于定型或型内鉴别。
9、如果7d之后无CPE出现，再盲传一代继续观察7d。
10、阴性对照在丢弃前要至少观察14d。
11、如果RD细胞出现阳性结果而14d后L20B细胞仍然阴性，要将RD细胞的阳性分离物在L20B细胞上续种一代，并且观察7d以排除脊髓灰质炎病毒存在的可能性。
12、除肠道病毒外，含有一些其他病毒（如弧肠弧病毒和肠腺病毒）的粪便接种到L20B细胞上也会产生CPE。一些非脊髓灰质炎肠道病毒也可在飞组织细胞和L20B细胞上产生CPE，应该进行脊髓灰质炎病毒定型试验以排除有脊髓灰质炎病毒的可能性。如果定型结果不能确定或无法解释，必须将此标本送上级脊髓灰质炎实验室进行进一步分析。
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