常用的免疫酶染色方法
分为以下两种方法：
（一）酶标抗体法
*直接法
*间接法
（二）非标记抗体酶法
*酶桥法
*PAP法
（一）酶标抗体法
*通过共价键将酶结合在抗体上，制成酶标抗体，与标本进行反应后，再用酶组化法将酶显色，使之生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，以供光镜和电镜观察。
-优点：切片能长期保存、反复观察，适于镜下半定量分析。
-缺点：酶与抗体形成的共价键，可损害抗体和酶的活性；易产生非特异染色。
(1) 酶标抗体法——直接法
将酶直接标记在一抗上，然后直接与相应抗原特异地结合。形成抗原-抗体-酶复合物，最后用底物显色剂显色。
(2) 酶标抗体法——间接法
*将酶标记在二抗上，先将一抗与相应的抗原结合，形成抗原抗体复合物，再用二抗(酶标抗体)与复合物中的特异抗体结合，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物，最后用底物显色剂显色。
(a) 酶标抗体间接法的操作步骤
*标本准备：
-石蜡脱蜡至水；
-冰冻切片浸入4°C丙酮固定10min，0.01M PBST漂洗，5min×3；
-细胞爬片先用PBS洗，然后4°C丙酮固定10min，再0.01M PBST漂洗，5min×3；
*石蜡切片需要进行抗原修复，其它标本则不用；
*封闭内源性过氧化物酶：3％H2O2-甲醇溶液室温孵育5～10min (湿盒内) ；
*0.01M PBST漂洗，5min×3；
*5～10%正常山羊血清(0.01M PBS稀释)封闭，室温孵育30min (湿盒内) ；
*倾去血清勿洗，加1％BSA(PBST配制)稀释的一抗， 37°C孵育60min 或4°C过夜(湿盒内)；
*0.01M PBST 漂洗，5min×3；
*加HRP 标记的二抗室温孵育lh或37°C 30min ；
*加0.01％H2O2~0.05％DAB显色 (显色液应新鲜配置)；
*经PBS漂洗3次后，梯度酒精脱水，二甲苯透明，明胶甘油封片，显微镜观察。
（二）非标记抗体酶法
酶桥法
*首先用酶免疫动物，制备效价高、特异性强的抗酶抗体；
*以二抗作桥，将抗酶抗体联结在一抗上；
*再将酶结合在抗酶抗体上，经显色显示抗原的分布
-优点：任何抗体均未被酶标记。酶是通过免疫学原理与酶抗体结合的。避免了共价连接对抗体和酶活性的损害，提高了方法的敏感性，而且节省一抗的用量。但抗酶抗体不易纯化。