病理科主要通过制病理切片完成免疫组化实验来诊断疾病。用来制作病理切片的组织样有括宫颈、痰、胸腹水及尿液等。病理切片有石蜡切片和冰冻切片两种,常见的是石蜡切片。
1 取材、固定:获取的组织样本经离心等处理后加入固定液,病理切片最常使用的固定液为10%福尔马林(4%甲醛)或10%磷酸缓冲福尔马林。固定液的用量一般为样本的20倍左右。
2洗涤、脱水、透明:固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀,否则会影响后期的染色效果。因此先用自动脱水机或乙醇对样本进行脱水。纯酒精不能与石蜡相溶,还需用能与酒精和石蜡相溶的媒浸液,替换出组织内的酒精,这种媒浸液称为透明剂。常见的透明剂有有二甲苯、苯、氯仿、正丁醇等。
3浸蜡与包埋:把样本放入盛有石蜡液的石蜡包埋机中进行包埋,在包埋机中经冷却制成固体样本。
4切片:包埋好的蜡块用刀片修成规整的四棱台,以少许热蜡液将其底部迅速贴附于小木块上,夹在石蜡切片机的蜡块钳内,使蜡块切面与切片刀刃平行,进行石蜡切片。
5贴片与烤片:在洁净的载玻片上涂抹薄层蛋白甘油,再将一定长度蜡带(连续切片)或用刀片断开成单个蜡片于温水(45℃左右)中展平后,捞至玻片上铺正,烘干或晾干。
6切片脱蜡与水化:干燥后的切片需脱蜡及水化才能在水溶性染液中进行染色。用二甲苯脱蜡,再逐级经纯酒精及梯度酒精直至蒸馏水。如果染料配制于酒精中,则将切片移至与酒精近似浓度时,即可染色。
7抗原修复:由于之前的化学试剂对抗原进行了封闭,热作用使抗原肽链扭曲会导致免疫组化染色不能显示,因此进项抗原修复。把玻片放在柠檬酸缓冲液(95-99℃)10分钟,冷却后放在EDTA溶液(95-99℃)15分钟,然后直接放在10 mM TE/1 mM EDTA溶液中(95-99℃)18分钟,最后用胃蛋白酶37℃消化30分钟。
8染色、观察:加入抗体后4℃孵育过夜,染色。染色成功后用蒸馏水进行冲洗,脱水后盖上盖玻片放在显微镜下观察。
国家卫计委规定县级医院病理室必备设备:快速冰冻切片机、病理石蜡切片机、自动组织包埋机、自动组织脱水处理机、免疫组化仪、光学显微镜。
标签:
    
阅读量:2880