炭疽（anthrax）是炭疽杆菌(Bacillus
anthracis)引起的动物源性传染病。炭疽杆菌主要从皮肤侵入引起皮肤炭疽，使皮肤形成焦痂溃疡与周围脓肿和毒血症，也可引起吸入性炭疽或胃肠炭疽，均可并发败血症。炭疽杆菌有可能作为生物武器被恐怖分子所利用，因而近年来得到国际社会的普遍关注。
人类主要经接触牲畜的毛皮和肉类获得感染，食肉动物也可从食草动物获得感染，并辗转感染人类。与牲畜接触频繁的人如牧民、兽医和屠宰工人的感染机会较多。被炭疽杆菌污染的毛、皮进入加工企业，或感染的肉类进入市场，也可能造成暴发流行。
人类感染炭疽杆菌主要通过接触途径，以皮肤炭疽最为常见。通常散发，病死率不高，可以彻底治愈，部分甚至能够自愈。但是，由于严重污染造成的吸入感染，或感染牲畜的肉类引起的食入感染，可能造成吸入性炭疽及胃肠炭疽的暴发流行，病死率甚高。严重感染者有时发生炭疽性脑膜炎 。
实验室检查：
一、血常规检查
主要为白细胞计数升高。一般为10～20×109/L，病情严重时高达60～80×109/L。分类显示中性粒细胞增高，可达70%以上。
二、病原学检查
炭疽杆菌的病原学操作，应在生物安全二级实验室中进行。
1、涂片及培养：采集皮肤溃疡的渗出物、排泄物、血、胸腹水及脑脊液等标本进行涂片和培养。所采标本经涂片、革兰氏及碱性美蓝染色后行显微镜检查，可观察到大量两端平齐、呈长串联状排列的革兰氏阳性杆菌，菌体较大，周围环绕荚膜。陈旧培养物经孔雀绿芽胞染色可见到大量的细菌芽胞。
荚膜染色：在玻片上涂组织液，或荚膜菌培养物，自然干燥。置纯甲醇或乙醇中固定1min，取出晾干。滴加多色美蓝染料染色3～5min，在次氯酸盐中脱色。水洗，吸干，油镜观察。菌体呈现蓝色，荚膜呈现红色。
所有标本都应立即涂片，染色，进行显微镜检查。随后进行细菌培养。
2、PCR检测：在正常的无菌标本（如血液、脑脊液）涂片镜检中，未发现大量均一的革兰氏阳性杆菌，而仅依靠细菌分离培养才能获得可疑的炭疽杆菌的细菌时，应尽可能进行PCR检测。可直接使用临床标本进行检测，也应对分离获得的培养物检测，标本可经沸水浴10min处理，或经蛋白酶K消化，并使用碘化钠-玻璃粉吸附以富集DNA。
推荐检测质粒上的保护性抗原基因（pag），荚膜形成基因（cya）和染色体上的炭疽杆菌特异基因（ropB）。推荐的引物序列为：pag:
F:5’-ATTTGCGGTAACACTTCACT-3’, R:5’
-AGACCGTGACAATGATGGAA-3’； cya: F:5’-CGGATTGTATATGGAGTGGG-3’,
R:5’-GGGACAGGAATGTTTGGATC-3’； ropb: F:5’-GTACGCCAATCGATATCATG-3’,
R:5’-GATCATCGTCATCTTCCG TA-3’。
PCR反应体系为50µl，包括下列成分：10×反应缓冲液，5µl；4×dNTP混合物（每种2.5mM），
4µl；引物（上游），1µl，引物（下游），1µl；内部对照模板，1µl；待测模板，1µl；无菌去离子水，36.75µl；Taq DNA
聚合酶，1ｕl；反应条件：95℃预变性5min，1个循环，之后95℃ 1 min，55℃ 1 min，72℃1 min。30个循环。最后72℃延伸5
min。结果分析：采用常规琼脂糖凝胶电泳，读胶仪检测。由于PCR技术有时会出现交叉污染和假阳性反应，应采取抗污染的PCR扩增方法，并对检测结果进行必要的PCR产物序列测定，以排除污染。
三、免疫学检查
在从患者标本中未获得炭疽杆菌阳性和分离结果的情况下，可依据血清学检验结果确定对患者的诊断。
首份血清应在首次检视患者时采取，通常应一次采取血液标本供涂片镜检、细菌分离培养、血清学抗体检查及常规的血液检查使用。血清分离后置4℃保存，应在5天内完成检测。如超过5天，应放置于-20℃冰箱保存。恢复期血清应在发病后15天左右采取。
恢复期血清应在发病后15日左右采取。
酶联免疫吸附试验（ELISA）
采用酶联免疫吸附试验，检测患者血液内炭疽杆菌保护性抗原的抗体，试验方法如下。
1、滴定板包被：所用各孔加入炭疽杆菌保护性抗原（PA）液（0.3μg/ml）100 μl，酶标板贴上封口膜，置4℃过夜。次日，弃孔内溶液，每孔加洗涤缓冲液100
μl，洗涤3次，每次3 min。
洗涤缓冲液配方为：
Tris 2.42 g
1 M HCl 13 ml
Tween-20（0.05％） 0.5
ml
加蒸馏水至 1000 ml
2、待检血清：样本的初筛：每孔加入100
μl待测血清，按倍比稀释（稀释液为生理盐水）至1∶8，置37℃ 60 min。弃孔内溶液，每孔加洗涤缓冲液100 μl，洗涤3次，每次3 min
(同时做空白、正常血清对照) 。复判：每份阳性血清做双复孔检测其滴度，增加测定结果的可分析性。
3、耦联酶标记：于各反应孔中加入新鲜稀释的工作浓度的辣根过氧化物酶标记SPA 或抗人IgG100 μl，酶标板贴上封口膜，置37℃ 60
min。弃孔内溶液，每孔加洗涤缓冲液100 μl，洗涤3次，每次3 min。
4、显色：于各反应孔中加入等体积混合的显色底物A、B溶液100
μl，酶标板贴上封口膜，置暗处20 min。于各反应孔中加入显色终止液（0.5 M H2SO4）100 μl终止反应
底物A液（磷酸盐柠檬酸缓冲液，pH5.0）配方为：
0.2 M Na2HPO4(28.4克／L) 25.7 ml
0.1
M柠檬酸(19.2克／L) 24.3 ml
H2O2 0.1%
蒸馏水 50 ml
底物B液（TMB〈四甲基联苯胺〉使用液）配方为：
TMB 3.90 g
柠檬酸 10.52 g
EDTA 1.86
g
甘油 2000 ml
DMSO 300 ml
加热溶解后加蒸馏水至 10000 ml
5、结果判断：实验结果可用酶标仪判读，被检孔吸光度（A）值达阴性血清对照孔OD值的2.1倍时，可判断为阳性。
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