T2毒素(T2)是由多种镰刀菌产生的一种霉菌毒素。主要污染小麦、大麦、玉米等粮食作物及其制品,对人类健康及畜牧业构成了较大危害。T2毒素主要影响血液,肝脏,肾脏,胰腺肌肉及淋巴细胞的功能,T2毒素中毒后的一般临床症状为厌食、呕吐、腹泻、生长停滞、繁殖和神经机能障碍等。
采用酶联免疫法可定性、定量检测玉米、大米、豆类、花生、燕麦、饲料等样本中的T2毒素。
一、实验原理:
采用间接竞争ELISA方法,在酶标板微孔上预包被T2毒素抗原,样本中T2毒素和此抗原竞争T2毒素抗体(抗试剂),同时T2毒素抗体与酶标二抗(酶标物)相结合,经TMB底物显色,通过酶标仪检测,样本吸光值与其含有的T2毒素成负相关,与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样本中T2毒素的含量。
二、实验需要的仪器设备(来宝商城提供)
1、天平:感量0.01g
2、粉碎机。
3、电动振荡器。
4、电热恒温水浴锅。
5、氮吹仪。
6、微量移液器:单道 10μL~100μL、100μL~1000μL,多道 300μL 。
7、离心机:≥4000r/min,配10mL离心管。
8、微孔板酶标仪450nm/630nm。
9、T2毒素ELISA检测试剂盒
10、移液管、洗耳球、漏斗、滤纸、具塞三角瓶等实验室常规仪器。
三、实验操作流程(具体实验步骤根据T2毒素ELISA检测试剂盒说明书进行检测)
1、样品前处理
称量—加提取液—震荡、过滤、离心—转移待测液
2、酶标分析
加标准品/样品提取液—加抗体溶液混合液,震荡—洗板—加底物,显色—加终止液,测定
3、定性或定量分析
四、注意事项:
1、试剂盒保存温度:2~8℃.
2、试剂盒使用前应在室温下放置30min以上,回复室温。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时需更换吸头。
5、实验之前须检查各种实验器具是否洁净,必须使用洁净实
验器具,以避免污染干扰实验结果。
6、处理好的样品盈立即进行检测。