脂类提取剂的选择及样品预处理
脂类提取剂的选择及样品预处理
食品中脂肪的存在形式有游离态的，也有结合态的。游离态的脂如动物性脂肪和植物性脂肪。结合态的脂如天然存在的磷脂、糖脂、脂蛋白等中的脂肪与蛋白质或碳水化合物等成分形成的结合态。对大多数食品来说，游离态的脂肪是主要的，结合态的脂肪含量较少。
一、 提取剂的选择
脂类的结构比较复杂，到现在没有一种溶剂能将纯脂肪萃取出来，也就是说提取出来的都是粗脂肪。（大部分是脂肪，还有一些其他成分）。前面讲性质时讲到，脂类不溶于水，易溶于有机溶剂。测定脂类大多采用低沸点的有机溶剂。常用的溶剂有乙醚、石油醚、氯仿—甲醇混合溶剂。其中乙醚溶解脂肪的能力强，应用最广泛。下面我们讲它们的特点：
（一） 乙醚（非极性）的优缺点
1、 优点
（1） 乙醚的沸点低为34.6℃
（2） 溶剂溶解脂肪能力强，大于石油醚
2、 缺点
（1） 能被2%的水饱和
（2） 含水的乙醚抽提能力降低（氧与水能形成氢键使穿透组织能力降低，即抽提能力下降）
（3） 含水乙醚可溶解非脂成分，使结果偏高（糖蛋白质等）
（4）乙醚易燃。
下面我们有一组试验，通过实验我们可以比较一下结果
提取卵磷脂25℃mg / 100g
低分子成分 无水乙醚 含水乙醚
葡萄糖 10.5mg/100g 315mg/100g
蔗糖 15mg/100g 150mg/100g
丝氨酸 0 15mg/100g
NaCl 0 25mg/100g
由此可见，乙醚含水后，能将样品中非脂成分溶解增加结果的重量，因此，使用乙醚时，样品不能含水分，必须干燥。而且使用乙醚时室内需空气流畅。因为乙醚在空气中，最大允许浓度为400ppm，超过这个极限易爆炸。
另外，乙醚经光照射易产生过氧化物，需避光，一般为棕色瓶储存，过氧化物也容易爆炸，如果乙醚贮存时间过长，在使用前一定要检查有无过氧化物，如果有应当除掉。
3、 检查过氧化物的方法
乙醚中加少量的Fe2+少量KCNS若有红色出现，说明有过氧化物存在，反之为无色，排除过氧化物的方法如下。
4、 排除过氧化物的方法
含过氧化物的乙醚中加入少量硫酸亚铁可除掉过氧化物。
（二）石油醚
石油醚溶解脂肪的能力比乙醚弱些，但吸收水分比乙醚少。没有乙醚易燃。使用时允许样品含有微量水分，它没有胶溶现象，不会夹带胶溶淀粉、蛋白质等物质。采用石油醚提取剂，测定值比较接近真实值。
乙醚、石油醚这两种溶剂适用于已烘干磨碎样品，不易潮解结块的样品，而且只能提取样品中游离态的脂肪，不能提取结合态的脂肪，对于结合态脂，必须预先用酸或碱破坏脂类和非脂成分的结合后才能提取。有时利用两种溶剂的优点，常常混合使用。
（三）氯仿-甲醇
氯仿-甲醇是另一种有效的溶剂，它对于脂蛋白，磷脂的提取效率较高，特别适用于水产品、家禽、蛋制品等食品脂肪的提取。
二、样品的预处理
样品的预处理方法决定于样品本身的性质，牛乳预处理非常简单，而植物和动物组织的处理方法较为复杂。
1、粉碎：
粉碎的方法很多，不论是切碎、碾磨、绞碎或者采用均质等处理方法，应当使样品中脂类物理、化学以及酶的降解都要减小到最小程度。
2、加海砂
有的样品易结块，用乙醚提取较困难，为了使样品保持散粒状可以加一些海砂，一般加样品的4-6倍量（目的使样品疏松，这样扩大了与有机溶剂的接触面积，有利于萃取）。
3、加入无水硫酸钠
因为乙醚可被2%水饱和，使乙醚不能渗入到组织内部，抽提脂肪的能力降低，所以有些样品含水量高时可加入无水硫酸钠，用量以样品呈散粒状为准。
4、干燥：
干燥的目的：提高脂肪的提取效率。
干燥时要注意温度：
温度过高
（1）脂肪氧化（2）脂肪与糖、蛋白质结合变成复合脂；
温度过低：脂肪易降解。
5、酸处理：
温度过高时，脂与与糖、蛋白质等接触变成复合脂，复合脂不能用极性溶剂直接提取，
所以要用酸处理结合脂肪，可参考以下实验：
面包：采用直接萃取 1.20% 脂肪，酸处理后萃取 1.73%脂肪
干全蛋：采用直接萃取 36.74% 脂肪，酸处理后萃取 42.39%脂肪
从这个实验可以看出，变成复合脂类，利用直接萃取得到的结果偏低，经过酸水解将使蛋白质，碳水化合物与脂肪分开，这样是脂肪游离出来后，再提取得到的数据准确。
6、对有些样品含有大量的碳水化合物，测定脂肪时应先用水洗掉水溶性碳水化合物再进行干燥、提取。
乙醚的纯化
1、久藏的乙醚常含有少量过氧化物；
2、过氧化物的检验：在干净试管中放入2-3滴浓硫酸，1mL2%碘化钾溶液（若碘化钾溶液已被空气氧化，可用稀亚硫酸钠溶液滴到黄色消失）和1-2滴淀粉溶液，混合均匀后加入乙醚，出现蓝色即表示有过氧化物存在。
3、过氧化物的去除：除去过氧化物可用新配制的硫酸亚铁稀溶液（配制方法是FeSO4.6H2O 60g，100mL水和6mL浓硫酸）。
将100mL乙醚和10mL新配制的硫酸亚铁溶液放在分液漏斗中洗数次，至无过氧化物为止。