常用方法：
洗涤法：
以5%EDTA抗凝的血样在室温下，以1500rpm/200g离心12分钟，离心后上层为富血小板的血浆，下层为积压的白细胞和红细胞。将富血小板血浆转入塑料试管，3500rpm/1200g离心5分钟。弃去上层血浆，用血小板洗涤液洗涤3次。
梯度密度离心法
梯度密度离心法常用的分离液有Ficoll、Fercoll、戊糖等，Ficoll是最适合于分离细胞的分离液。Ficoll主要成分是一种合成的 蔗糖聚合物，具有高密度、低渗透压、无毒性的特点。分离时先将分层液置试管底层，然后将抗凝全血以PBS稀释叠加在分层液上面，水平式离心后，血小板因密度小而悬浮于上层，将上层液体吸出，用血小板洗涤液洗涤三次便可得到纯化后的血小板。
凝胶过滤：
凝胶过滤又称凝胶色谱、凝胶层析。该技术是建立在分子筛概念的基础上的。一般常用的材料有葡聚糖、琼脂糖、聚丙烯酰胺等。血小板纯化常用的是牛血清琼脂糖凝胶。将分离出来的富血小板血浆铺加于凝胶表面。离心使其在凝胶柱中流滤。血小板只能沿凝胶颗粒间的空隙随溶剂流动，不能进入凝胶颗粒的内部，故租滞作用小，流程短，流动速度快而先流出凝胶柱。血浆蛋白渗入凝胶颗粒网内，故租滞作用大，移动速度慢而较迟流出凝胶柱，从而达到纯化血小板的目的。
近期发展起来的先进分离技术
免疫磁珠分选技术
免疫磁珠分选技术（MACS）是高效简捷的血小板分离纯化方法。MACS是；利用血小板表面标志CD61进行分离的。将单克隆抗体CD61-PE包被在磁珠上，然后包被上单克隆抗体的磁珠与血小板特异性结合。磁珠携带者3与之结合的血小板吸附于分离柱上，没有与磁珠集合的阴性细胞流出，从而实现了血小板的分离。
用MACS细胞分选系统可以分离出非常纯的血小板，纯度可以达到80%-99%，连续两次过柱分选可进一步提高血小板纯度，通常可达到95%-99%以上。而且，由于微型磁珠的体积极小，其直径只有50nm，所以不会对血小板造成机械性压力，而且使孵育时间短，操作过程快。
流式细胞术
流式细胞分选技术是目前最先进的分离纯化技术之一。血液中的血小板在激光束的照射下发出散射光和荧光，经探测器检测，转换为电信号，经计算机处理，被确认为CD61阳性细胞，超声压电晶体通电后发生高频震动，使细胞流动室流出的液流束断成一连串均匀的液滴，每秒钟形成液滴上万个，每个液滴包含着一个样品细胞。CD61阳性的血小板被充电，在通过偏转的高压静电场时向左或向右偏转被收集在制定容器中。阴性细胞不发生偏转进入中间废液收集器中，从而实现了分选。
流式细胞仪分离细胞速度大概为4500000个每小时，经分选可获得高纯度、高回收率及高活细胞率，所以分离的血小板仍然可保持无菌、原有结构和生物活性。上述特点决定流式细胞术分离血小板无疑可获得最佳效果。但该方法的限制性，首先在于费用昂贵，需要流式细胞仪这样的特殊设备，其次所需时间较长，如加大压力和流速、则造成了细胞的损失，因此，人们常常在流式细胞分选血小板前，作其分离的预分离，分离出富血小板，以提高血小板在样本中所占的比例，从而可以提高压力和流速，节省时间。
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