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人单核细胞白血病细胞

人单核细胞白血病细胞

产品介绍:

细胞描述:

该细胞从一名1岁的患有急性单核细胞性白血病的男孩的外周血中分离建立。该细胞可以吞噬乳胶颗粒和激活的红细胞,细胞膜和胞浆内均没有免疫球蛋白,表达c3r和fcr;可受佛波酯tpa诱导向单核系方向分化;可作为转染宿主。

细胞特性:

1)来源:急性单核细胞白血病,单核细胞

2)形态:单核细胞,悬浮

3)规格:1×106cells

4)培养条件:rpmi-1640培养基 10优质胎牛血清 双抗1 0.05mmβ-巯基乙醇

空气,95;二氧化碳,5%。37℃

特殊说明:

该细胞为悬浮细胞,根据培养经验以及客户的反馈,传代时使用【半换液法】对细胞状态较为有利,因此我库建议您使用【半换液法】进行传代。

1. 您在收到我们提供的用15ml离心管(充液为完全培养基)发货的细胞后,请不要通过离心的方式收集细胞,可以先准备两个新的t25培养瓶,然后将细胞混合均匀后移入两个新的t25培养瓶中,补加培养基到10ml。放入到37℃培养箱中。

2. 您在收到的是用t25培养瓶发货的细胞,请先通过离心的方式收集细胞,然后将细胞重悬加入12ml按照说明书要求配置的完全培养基吹打均匀后移入两个新的t25培养瓶中培养即可。

3. thp-1悬浮细胞。该细胞在培养时更喜欢温和处理,培养时尽量少对细胞进行离心处理以此造成对细胞的伤害。换液时不要全培养基更换,建议您使用【半换液法】进行传代,添加细胞培养基以稀释细胞至维持密度即可。

4. 细胞对血清质量较为敏感,我库建议您使用进口大品牌优质血清进行培养。fbs不要灭活,如果细胞生长缓慢请尝试使用其他fbs或暂时将fbs浓度增加到20。

5. 该细胞的培养液中需添加β-巯基乙醇(细胞培养级别),若不添加,可能会对细胞状态造成影响。

β-巯基乙醇的稳定性有限,不可将β-巯基乙醇添加到完全培养基中长期储存,在每次传代或液体添加时再添加β-巯基乙醇。

β-巯基乙醇(2-巯基乙醇)被添加到淋巴细胞或其他细胞培养物中,因为在培养基中使用的fbs中氨基酸半胱氨酸供不应求,而胱氨酸则很多。有些细胞(例如t细胞)无法将半胱氨酸转运到细胞质中,必须将其转化为半胱氨酸。β-巯基乙醇将胱氨酸还原为可被细胞转运的形式,然后转化为细胞生长所需的半胱氨酸。β-巯基乙醇还是一种还原剂,可以分解培养中细胞产生的许多有毒代谢产物,从而改善细胞周围的环境。

6. 该细胞对细胞密度较为敏感,培养、传代时请注意保持细胞密度在合适的范围(具体请参考细胞说明书)。

7. 该细胞冻存后复苏率较低,冻存时请酌情提高细胞量

8. 通常情况下可以通过向正在生长的细胞中添加完全培养基来维持细胞的生长,每7天可以将细胞离心并重悬于新配的培养基中,来完成细胞的全换液。通常情况下可以通过向正在生长的细胞中添加完全培养基来维持细胞的生长,每7天可以将细胞离心并重悬于新配的培养基中,来完成细胞的全换液。

细胞接收后的处理:

1)收到细胞后,活细胞首先观察培养瓶是否完好,培养液是否漏液,培养基是否浑浊;冻存细胞是否干冰已挥发完,冻存管盖是否脱落,破碎,若有这类情况,请务必拍照记录,并于收货24h内与我们联系。

2)细胞处理:

复苏的细胞:如果是t-25培养瓶活细胞,收到后请用75的酒精对培养瓶表面进行消毒处理,然后转入培养箱中静置2~3h后再进行后续处理。

备注:运输用的培养基不宜再次用来培养细胞,请按照说明书新配置完全培养基来培养细胞。 &nbsp

冻存细胞:如果是干冰运输的冻存细胞,收到后请立即转入液氮存储或者短暂(24h)放置-80度冰箱保存,或者直接进行细胞复苏。

细胞复苏、传代及冻存流程参考:

1、细胞复苏

1)配制完全培养基:基础培养基 胎牛血清 双抗(特殊培养基特殊配置);

2)细胞复苏:取5ml完全培养基于15ml离心管中,37℃水浴锅预热,从液氮管(或者-80度冰箱)中快速取出冻存的细胞,放入37℃水浴锅中,摇晃使快速化冻(1min左右),然后将化冻的细胞和预热的培养基,移入超净工作台中,化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5min;

3)吸弃上清,得到细胞沉淀,用2ml完全培养基轻轻重悬细胞,加入到t25培养瓶中,做好标记,放入37℃,5co2饱和适度培养箱中培养(培养皿复苏效果更好);

4)24h后,观察细胞贴壁情况(未贴壁的即为死细胞针对贴壁细胞),吸弃旧培养基,加入新鲜的预热(室温或37℃)的完全培养基,继续培养。

2、细胞传代

1)待细胞生长到80-90汇合度时,吸弃旧的培养基,加入1ml无菌pbs润洗一次,以去除残余的培养基及血清(血清含有胰酶的抑制因子),然后加入1ml 0.25胰酶,37℃培养箱中消化(1~2min左右,不同细胞消化时间不同),取出细胞,镜下观察细胞至细胞皱缩变圆;

2)加入1ml完全培养基(含fbs)终止消化,轻轻拍打,使细胞脱落下来成单个细胞悬液,收集细胞于15ml无菌离心管中,1000rpm,离心5min;

3)收集细胞沉淀,完全培养基重悬,一分为二(可根据细胞生长速度调整比例),分别加入到2个新的培养瓶中,做好标记,放入培养箱中培养。

3、细胞冻存

1)按照细胞传代方法,在超净工作台内消化收集细胞沉淀,取少量细胞用于计数;

2)用预冷的1ml冻存液(90完全培养基 10dmso)或者无血清细胞冻存液重悬细胞,加入到1.2ml冻存管中,密度为1*106个/ml。

3)放入程序冻存盒,-80℃过夜后,转入液氮长期保存。


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