Hi T7 RNA 聚合酶对T7噬菌体启动子具有高度的特异性,并可以其作为启动子,DNA作为模板体外合成正义链RNA。线性质粒、PCR产物双链DNA均可作为T7 RNA 聚合酶的底物模板。Hi T7 RNA聚合酶经电子重构架及库筛选,与Wild型相比,该酶的DNA模板结合区域亲和力更高,使其具有持续合成能力,从而获得更高的产量,并易于长片段RNA的合成。
Hi T7高产RNA合成试剂盒是基于Hi T7 RNA聚合酶而组建的试剂盒,20 μl反应即可获得150-200 μg的总产量(产量超过 MegaScript T7 Transcription kit)。利用该高产RNA试剂盒可在体外高效合成多种类型的 RNA,如mRNA、lncRNA、shRNA等。Hi T7 RNA聚合酶识别T7 promoter(TAATACGACTCA CTATA G G)以倒数第二个G碱基为起点开始转录,转录长度可达5000nt以上。利用该试剂盒得到的RNA适用于多种下游应用,如RNA结构和功能研究、核酸酶生物化学研究、RNase保护分析探针、印迹杂交、反义 RNA 及 RNAi 实验、微阵列分析、显微注射、体外翻译和 RNA 疫苗等。
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