1、标本采取
于脐部末进行消毒处理和注射破伤风抗毒素之前，用无菌棉棒于脐部化脓部位取浓汁及坏死组织，至少应同时取两份标本，一份做涂片检查，另一份按厌氧菌要求做厌氧培养。
2、直接镜检
取上述标本直接涂片，革兰染色后镜检，观察菌体大小、形态及特征。菌体长2-5um，宽0.4-0.5um，两端顿圆，无荚膜。本菌为革兰阳性细菌。鞭毛染色镜检，可见周身鞭毛。
3、厌氧培养
破伤风杆菌为专性厌氧菌，需在厌氧培养设备（厌氧箱、厌氧罐或厌氧袋）中处理标本。将标本分别接种于数管肉渣汤及牛乳培养基上，加盖凡士林，然后取其中1-2管加热80℃10min以杀死无芽孢菌。其余各管不加热，皆放在37℃孵育，观察细菌生长情况，做涂片染色镜检。
在37℃培养的标本，48h后即能生成芽孢，成熟的芽孢为正圆形，未成熟的芽孢为卵圆形，芽孢较菌体直径大，芽孢位于菌体的顶端将菌体膨胀呈鼓槌状。
另将标本涂于血琼脂平皿上(培养基中加适量新霉素以抑制杂菌生长）行厌氧培养。如无厌氧箱等设备，则可用带有异丁烯橡胶塞子和含有氧化还原指示剂的无菌试管送检。如是棉签采集的标本，应直接放入含有还原剂的简易培养基中或硫乙醇钠培养基中。
破伤风杆菌在不同培养基上的生长情况
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