单纯疱疹病毒采用酶免法进行检测,用到单纯疱疹病毒(Ⅱ型)IgM抗体诊断试剂盒。
样本要求:血清标本按照常规方法由静脉采集。血浆标本可采用常规用量的肝素或或枸缘酸钠抗凝。5天内测定的标本可放置4℃保存。标本放置在-20℃可保存3个月。标本避免溶血或反复冻融。混浊或有沉淀的标本应离心或过滤澄清后再检测。需保存的血清在采集、保存过程中应注意无菌操作。
实验方法:
1、平衡:将试剂盒从冷藏环境中取出,置室温平衡30min后使用。
2、配液:将浓缩洗液用蒸馏水或去离子水20倍稀释备用。
3、设定:每次实验应预设空白对照孔1孔(暂不加任何液体),阴性对照孔3孔,阳性对照孔2孔.
4、加样:按顺序在各反应空中分别加入20ul待检测样本和阴性、、阳性对照。
5、加酶:依次向每孔加入100ul酶结合物(空白对照孔不加入),振荡混匀。
6、孵育:在反应板上加盖封板膜,置37℃培养箱或水箱中反应60min。
7、洗板:将孔内液体甩干,在各反应孔中加入稀释后的洗涤液300ul,静置15秒,甩弃洗涤液;如此洗涤5遍,最后依次拍干反应板。
8、显色:每孔加入终止液各50ul(包括空白对照孔)、振荡混匀终止反应。
9、终止:每孔加入终止液50ul(包括空白对照孔),振荡混匀终止反应。
10、测定:用空白对照孔调零,并尽快用酶标仪单波长测各孔OD值,也可用双波长450nm/630nm-690nm测各孔OD值
实验结果分析:
临界值=0.10+阴性OD平均值(阴性对照平均值≤0.05按0.05计算)
结果判定:测定样本OD值≥临界值时为抗HSV-IgM抗体阳性
测定样本OD值<临界值时为抗HSV-IgM抗体阴性
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