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中药中黄曲霉毒素检测方案

2016/9/20 17:01:33      来宝商城

 黄曲霉毒素(AF)是由黄曲霉素和寄生曲霉产生的次级代谢产物,主要包括B1、B2、G1、G2,其中B1毒性最强烈,是目前发现的毒性最大的一类真菌毒素。黄曲霉毒素被世界卫生组织划定为1类致癌物,中药在采集、制备、贮藏、运输的过程中很容易因为保存不好受潮霉变而受到黄曲霉毒素的污染,对人类的健康和生命安全造成威胁,因此对中药进行黄曲霉毒素的检测是十分必要的

 高效液相法(HPLC)是目前中药中黄曲霉毒素测定的常用方法,该法具有专属性较强,重现性较好,假阳性率较低的优点,下面我们就来具体介绍一下。

一、原理:

 样品经过甲醇-水提取,提取液经过滤、稀释后,经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和柱净化、此抗体对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2具有专一性,黄曲霉毒素交联在层析介质的抗体上,首先用水将免疫亲和柱上的杂质除去,然后用甲醇通过免疫亲和层析柱洗脱,洗脱液经过带有荧光检测器的高效液相色谱仪柱后碘溶液衍生,测定黄曲霉毒素的含量。

二、适用范围:

 柏子仁、莲子、使君子、槟榔、麦芽、肉豆蔻、决明子、远志、薏苡仁、大枣、地龙、蜈蚣、水蛭、全蝎等14味药材及其饮片及其制品中黄曲霉毒素(B1、B2、G1、G2)含量的测定

三、实验步骤:

1、实验准备

①、混合对照品溶液的制备

 精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液(其中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的标示量分别为1.0ug/ml、0.3ug/ml、1.0ug/ml、0.3ug/ml)0.5ml,置10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,作为储备溶液,精密量取储备液1ml,置25ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度即得

②、供试品溶液的制备

 取供试品粉末约15g,精密称定,置于均质瓶中;加入氯化钠3g,精密加入70%甲醇溶液75ml,高速离心2分钟(搅拌速度大于11000r/min),离心5分钟(转速2500r/min);精密量取上清液15ml,置50ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜过滤,量取续滤液20.0ml,通过免疫亲和柱,流速每分钟3ml,用水20ml洗脱,洗脱液弃去,使空气进入柱子,将水挤出柱子,再用适量甲醇洗脱,搜集洗脱液,置2ml量瓶中,并用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得

2、测定

①、分别移取上述混合对照品溶液5ul、10ul、15ul、20ul、25ul,注入液相色谱仪,测定峰面积,以峰面积为纵坐标,进样量为横坐标,绘制标准曲线

②、另精密吸取上述供试品溶液20-25ul,注入液相色谱仪,测定峰面积,从标准曲线上读出供试品溶液中相当于黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的量,计算即得


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