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LO-2 人正常肝细胞

Human Normal Liver Cells
  • 分类:
    • 细胞系
  • 种属:
    • 人源
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细胞介绍 L-02细胞建系鉴定于1980年。该细胞是一株正常肝细胞系,具有典型的肝细胞形态学特征,可用于多种实验研究。 细胞特性 1)来源:肝脏 2)形态:上皮细胞样,贴壁生长 3)含量:>1x10 6 个/mL 4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性 5)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装 运输和保存 可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式 (1)干冰运输,收到后立即转入液氮冻存或直接复苏; (2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。 细胞用途 :仅供科研使用。                         细胞培养步骤 一.培养基及培养冻存条件准备: 1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091);北美胎牛血清,20%;双抗1%。 2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮储存。 二.细胞处理: 1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。 2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于贴壁细胞,传代可参考以下方法: 1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例; 1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。 2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X10 6 个细胞冻存。 3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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