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LNCAP 人前列腺癌细胞

Human Prostate Cancer Cells
  • 分类:
    • 细胞系
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细胞介绍 人前列腺癌细胞LNCaP克隆FGC是从一位50岁白人男性(血型B+)的左锁骨淋巴结针刺活检中分离,该患者经确诊为前列腺癌转移。这株细胞对5-α-二氢睾酮(生长调节子和酸性磷酸脂酶产物)有响应。这株细胞并不形成一致的单层,而是形成集落,在传代时可以用滴管反复吹吸打碎。它们仅仅轻轻地吸附在基底上,不形成汇合,很快使培养基变酸。生长很慢,传代后48小时内不应扰动。当培养瓶封包后,多数细胞从培养瓶底分离,悬浮在培养基中。收到后,在通常培养单层细胞的条件下培养24到48小时,以使细胞再贴壁。此后可以换上新鲜培养液。如果需要,培养瓶内容物可以收集,300g离心15分钟,以10毫升培养液重悬并培养到一个单独的培养瓶中。请使用Corning的Cellbind培养瓶培养。   细胞特性 1) 来源:前列腺;左锁骨淋巴结癌转移灶 2) 形态:上皮细胞样 3) 含量:>1x106 个/mL 4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性 5) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装   运输和保存 可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式 (1)干冰运输,收到后立即转入液氮冻存或直接复苏; (2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。   细胞用途:仅供科研使用。   细胞接受后的处理: 1) 收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。 2) 请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。 3) 弃去T25瓶中的培养基,添加6ml新的完全培养基。 4) 如果细胞长满(90%以上)请及时进行细胞传代。 5) 接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。                         细胞培养步骤 一.培养基及培养冻存条件准备: 1) 准备RPMI-1640培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。 2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。 3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。 二. 细胞处理: 1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入250px皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。 2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于贴壁细胞,传代可参考以下方法: 1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。 4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3) 细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。 下面T25瓶为例; 1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。 2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。 3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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